课题微生物实验室培养.ppt

课题微生物实验室培养;;细菌的外形与大小; 细菌细胞由外向里依次有鞭毛、菌（纤）毛、荚膜、细胞壁、细胞膜、细胞质，细胞质中又有液泡、储存性颗粒、核质等。;*细胞壁;芽孢;菌落：;菌落;细菌菌落具有一些共同的特征：小、湿润、粘稠、与基质结合松散，易被剥离，质地均匀，各部位颜色一致。但不同的细菌菌落也具有自己特有的特征。 ;细菌的营养类型 ;放线菌;链霉素、土霉素、四环素、 氯霉素、红霉素、庆大霉素 ;病毒的结构;病毒;SARS病毒、 禽流感病毒;朊病毒（蛋白质病毒）;2、病毒的增殖：;真菌;;生殖;一、基础知识：;菌落;固体培养基：菌落;液体培养基：;2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方;选择培养基; 根据细胞生存所需物质的种类和数量，用人工方法模拟合成的。 合成培养基主要成分是氨基酸、维生素、碳水化合物、无机盐和其它一些辅助物质。 优点：标准化生产，组分和含量相对固定;成本低 缺点：缺少某些成分，不能完全满足体外细胞生长需要。 ; 天然培养基有血清、血浆和组织提取液（如鸡胚和牛胚浸液）。 优点：营养成分丰富，培养效果好 缺点：来源受限; 成分复杂，影响对某些实验产物的提取和实验结果的分析;易发生污染;;血清中含有： ①多种蛋白质（白蛋白、球蛋白、铁蛋白等） ②多种金属离子； ③激素； ④促贴附物质，如纤粘蛋白、冷析球蛋白、胶原等。 ⑤各种生长因子 ⑥转移蛋白 ⑦不明成分;（二）无菌技术;　（１）消毒的概念： 　　使用较为温和的化学或物理方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。;　　（2）灭菌的概念：;1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min 2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下煮15min 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源 4、紫外线消毒 ……;1、灼烧灭菌;2、干热灭菌： 160-170 ℃下加热1-2h。 3、高压蒸气灭菌：100kPa、121 ℃下维持15-30min.; 最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌，它可以杀灭所有的生物，包括最耐热的某些微生物的休眠体，同时可以基本保持培养基的营养成分不被破坏。 有些??璃器皿也可采用高温干热灭菌。为了防止杂菌，特别是空气中的杂菌污染，试管及玻璃烧瓶都需采用适宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各种金属、塑料及硅胶帽，它们只可让空气通过，而空气中的其他微生物不能通过。 而培养皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专为防止空气中微生物的污染而设计的。 ;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？;微生物实验室培养的基本操作程序;二、实验操作;1．计算、称量 2．溶化 3．调pH：　pH7．6　 4．过滤：这一步可以省去。 5．分装：分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜。 6．加塞 7．包扎; 8．灭菌: 将50ml培养基用玻棒转移至三角锥瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮纸，再放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。将培养皿用旧报纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。;培养皿通常称平板 细菌在培养基上生长，会形成各种颜色和外观的菌落。;倒平板技术;1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？;3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？;2、纯化大肠杆菌; 平板划线的操作方法 ;平板划线的操作;;问题讨论;2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？;稀释涂布平板法;问题讨论;微生物的恒温培养;微生物的恒温培养;三、课题成果评价 ;菌种的保存;本课题知识小结:;【典例解析】