第十八章 嗨免疫学检测技术及其应用.ppt

ELISA(双抗体夹心法-测Ag) （2）酶联免疫斑点试验（ ELISPOT ） 用于效应细胞分泌单一细胞因子的测定。 （3）BAS-ELISA 生物素-亲和素系统（BAS）是一生物放大系统，利用亲和素-生物素-酶的连接关系，追踪生物素标记的抗原或抗体，通过酶催化底物显色，检测相应的抗体或抗原，灵敏度高。 （4）免疫组化技术 Immunohistochemisty Technique 是用标记的已知抗体与组织或细胞表面相应抗原结合发生反应，对抗原进行定位、定性或定量检测的技术。 2. 免疫荧光法(异硫氰酸荧光素、藻红蛋白) 直接法 ：用已知荧光标记的抗体检测未知抗原。 间接法： 用荧光标记的抗抗体，检测未知的抗原/抗体。 补体法： 3. 放射免疫测定（RIA） 将放射性核素分析的高度灵敏性与抗原抗体反应的特异性结合起来的技术，测定激素和药物。 常用I125和I131 快速，敏感（pg)，但污染环境，有一定的危害性。 4. 免疫胶体金技术（ICS） Immunological colloidal gold signature 是用胶体金颗粒标记抗体或抗原，用以检测未知抗原或抗体的技术，可用于多种液相免疫测定和固相免疫分析。 免疫层析法：immunochromatography 免疫层析法操作和原理 ①首先将已知特异性抗体固定于硝酸纤维素膜上某一区带； ②测试时将上述硝酸纤维素膜一端浸入待检样品中（尿液或血清），通过毛细管作用样品将沿膜向前移动； ③当样品进入特异性抗体固定区带时，若样品中含有相应抗原即可与该区带抗体特异性结合，进而通过免疫胶体金所呈现的紫红色条带判定试验结果。 早孕诊断（硝酸纤维素膜诊断试纸制备） ①首先将胶体金致敏抗体—胶体金标记的鼠抗人绒毛膜促性腺激素（HCG）特异性抗体，松弛附着在玻璃纤维上，再将上述玻璃纤维固定在硝酸纤维素膜G处； ②将鼠抗人HCG特异性抗体固定在硝酸纤维素膜T处； ③将兔抗鼠IgG抗体（二抗）固定在硝酸纤维素膜C处； ④硝酸纤维素膜最下方A处（附吸水纸）是滴加待检或接触尿液部位，在硝酸纤维素膜最上方B处有吸水纸，有助于形成毛细管层析作用。 早孕诊断（原理 ） 将待检尿液滴加在检测试纸A区，或将检测试纸A区插入待检尿液中，通过层析作用待检尿液向B区移动，流经G区时将胶体金标记HCG抗体从玻璃纤维上复溶，若待检尿液中含有HCG，即形成胶体金标记抗体-HCG复合物；上述复合物迁移至T区时，可被固相HCG抗体识别结合，形成固相HCG抗体-HCG-胶体金标记抗体复合物，胶体金聚集呈现阳性紫红色检测线；剩余胶体金标记抗体迁移到C区与兔抗鼠IgG抗体（二抗）结合，胶体金聚集呈现紫红色质控线。 胶体金免疫层析双抗夹心法试验原理示意图 早孕诊断（结果分析） ①测试纸条出现两条紫红色反应线：为早孕阳性； ②测试纸条检测线颜色弱于质控线：为早孕弱阳性； ③测试纸条仅在质控线呈现紫红色条带：为早孕阴性； ④测试纸条质控线处无紫色条带出现：为试验无效。 （二） 沉淀反应(precipitation)  可溶性抗原+相应抗体→沉淀 单向琼脂扩散试验：测Ig、补体含量。 双向琼脂扩散试验： 火箭电泳：Ag 置“－”极 对流免疫电泳：Ag置“－”极，Ab置“＋”极 免疫电泳： 免疫比浊法： 环状沉淀 絮状沉淀 1. 单向琼脂扩散试验 2. 双向琼脂扩散试验 3. 对流免疫电泳 原理：将双扩与电泳技术结合在一起，测定可溶 性抗原。 阴极 阳极 （-） （+） 电泳 电渗 Ag Ab 4. 火箭电泳 将单向免疫扩散与电泳技术结合，可快速测定标本中可溶性抗原的含量。 5. 免疫电泳 先电泳分离标本中抗原成分，再沿电泳方向挖抗体槽，加抗体，进行双扩。用于血清蛋白及抗体成分的分析及抗原/抗体提取物纯化鉴定。 6. 免疫比浊法 该技术是利用抗原－抗体复合物在液相中形成浊度来测量抗原含量的方法。 方法： 透射光比浊法 散射光比浊法 免疫乳胶比浊法 速率抑制免疫比浊法 （三）补体参加的反应 此类反应是利用抗体与红细胞表面相应抗原结合后，使反应体系中补体激活导致红细胞破坏，出现溶血现象建立的。 补体结合实验： 待测抗原＋待测抗体（待测的反应系统）