动物细胞培养和核移植技术sxh.pptx

第1页/共29页2.2 动物细胞工程动物细胞工程常用的技术动物细胞培养是其他动物细胞工程技术的基础。动物细胞融合动物细胞核移植单克隆抗体等 第2页/共29页动物细胞培养和核移植技术1.动物细胞培养概念 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。如何进行细胞培养?培养时又需要提供哪些必要条件呢？ 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养阅读课文44--46面相关内容：第3页/共29页原代动物细胞培养的过程:第4页/共29页细胞增殖缓慢，核型可能变化1.2 动物细胞培养过程胚胎或幼龄动物的组织器官比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，增殖能力越强，越容易培养。剪碎胰蛋白酶用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。细胞悬液贴壁生长接触抑制原代培养10代以内，保持正常二倍体核型传代培养10代细胞洗涤、稀释、分离50代细胞动物细胞培养不能最终培养成生物体原理？：细胞增殖第5页/共29页讨 论 多细胞动物和人体的细胞都生活在内环境中，根据你所学的内环境的知识，思考以下问题： 1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？ 2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？ 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、促生长因子和动物血清等。适宜温度、 PH和气体环境； 无菌无毒环境36.5 +度PH为O2和CO2（95%空气和5% CO2 ）第6页/共29页培养箱无菌操作第7页/共29页培养器皿动物细胞培养瓶内表面为什么要光滑、无毒？第8页/共29页植物细胞和动物细胞培养的比较比较项目植物组织培养动物细胞培养细胞增殖细胞的全能性原 理固体培养基液体培养基培养基性质葡萄糖、动物血清促生长因子蔗糖、植物激素培养基特有成分新的个体或细胞产品培养结果细胞或细胞产品获得细胞快速繁殖、培育无病毒植株等培养目的或细胞产物第9页/共29页动物细胞培养技术的应用 大规模的生产有重要价值的生物制品 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体为基因工程技术提供受体细胞 有毒物质的检测细胞的生理、药理、病理研究 如用于筛选抗癌药物等，为治疗和预防癌症及其他疾病提供依据培养健康细胞用于烧伤病人皮肤移植第10页/共29页 想一想比较植物组织培养和动物细胞培养（原理、培养结果） ？动物细胞特点：分化潜能变窄：随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制，分化潜能变窄，这是指整体细胞而言。细胞核仍具有全能性：细胞核，它含有保持物种遗传性所需的全套基因，而且并没有因细胞分化而丢失基因，因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性。第11页/共29页胚胎细胞核移植：体细胞核移植：2.动物细胞核移植技术和克隆动物2.1 动物细胞核移植概念： 将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）细胞分化程度低，恢复全能性容易分类细胞分化程度高，恢复全能性不容易 第12页/共29页体细胞核移植的过程：卵黄膜请看教材P48图2-21思考：1.核移植的受体细胞是什么？处在什么时期？2.通过什么手段激活受体细胞，构建重组胚胎？ MⅡ中期卵母细胞诱导方法：物理或化学方法激活受体细胞，完成细胞分裂和发育进程。3.原理：细胞核的全能性4.为什么选择卵母细胞作为核移植的受体细胞？卵母细胞体积大、易操作，含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。第13页/共29页例.在克隆多利羊的过程中，下列哪项技术没有运用到（ ）A.细胞培养技术B.细胞核移植C.胚胎移植技术D.基因工程技术D无性生殖核移植过程第14页/共29页供体细胞（供核）细胞培养体细胞细胞融合重组细胞注入卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质）去核无核卵母细胞胚胎移植生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛构建重组胚胎代孕母体归纳:共分成两大阶段：核移植和胚胎移植。思考：你认为用上述体细胞核移植方法生产的克隆动物，是对体细胞供体动物进行了100%的复制吗？为什么？绝大部分DNA来自于供体细胞核，但其核外还有少量的DNA，即线粒体中的DNA是来自于受体卵母细胞。克隆动物的性别取决于？第15页/共29页讨论：1.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？ 为使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞，在供体细胞的细胞核移至受体细胞之前，必须将受体细胞的遗传物质去掉或将其破坏。第16页/共29页2.用于核移植的供体细胞一般都选用传代10代以内的细胞，想一想，这是为什么？ 培养的动物细胞一般当传代至10～50代左右时，部分细胞核型可能会发生变化，其细胞遗传物质