动物细胞培养和核移植技术上课用.pptxVIP

2.2 动物细胞工程第1页，共33页。学习目标：1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用2、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的第2页，共33页。复习：植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养技术、 植物体细胞杂交技术动物细胞工程常用的技术手段：动物细胞培养技术、 动物细胞核移植技术、动物细胞融合技术、 生产单克隆抗体技术动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。第3页，共33页。一、动物细胞培养过程阅读“动物细胞培养过程”并思考： 1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？ 特点是什么？ 2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？ 3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 6、简述动物细胞培养的操作过程第4页，共33页。动物细胞培养过程：原代培养传代培养第5页，共33页。聚焦一、动物细胞培养过程 1、动物细胞培养的概念是什么？该技术实施的原理是什么？ 从动物机体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。 原理是细胞增殖 （有丝分裂） 。第6页，共33页。动物细胞生长特点：细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 第7页，共33页。那么什么是接触抑制？细胞贴壁过程第8页，共33页。动物细胞生长特性失去接触抑制50代以后接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。接触抑制第9页，共33页。一、动物细胞培养过程 2、为什么要对取出的动物组织进行处理，使细胞分散？ 分散的单个细胞容易摄取所需的营养，排出代谢废物；而用大块组织培养时，内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。 第10页，共33页。一、动物细胞培养过程 3、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么？用胃蛋白酶可以吗？ 细胞间的物质主要是蛋白质（胶原纤维）。 胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境pH为7.2～8.4。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4。 第11页，共33页。一、动物细胞培养过程4、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？ 胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外，长时间的作用也会消化细胞膜蛋白，对细胞有损伤作用，因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。 第12页，共33页。一、动物细胞培养过程 5、为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们的细胞分化程度低，增殖能力强，分裂旺盛，容易培养。第13页，共33页。6、动物细胞培养过程：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官50代细胞遗传物质未改变细胞株细胞系遗传物质已改变传代培养一般传至10代直至50代就不能再分裂了，这时细胞核内遗传物质未发生变化，形成的细胞群胰蛋白酶单个细胞传代培养过程中有个别细胞传至50代以后，由于遗传物质改变，失去控制，成为无限增殖的不死的癌症细胞，形成的细胞群加培养液细胞悬浮液原代培养10代细胞传代培养动物细胞培养不能最终培养成生物体无限传代第14页，共33页。一、动物细胞培养过程 7、什么是原代培养、传代培养？为什么要进行传代培养？原代培养： 取材（动物组织） →细胞分散→初次培养传代培养： 培养的细胞→细胞分散→继续培养进行传代培养的原因： 接触抑制第15页，共33页。一、动物细胞培养过程8、传代培养中，第10代细胞与第50代以后细胞的主要区别是什么？ 细胞癌变,失去接触抑制特性。第16页，共33页。一、动物细胞培养过程 9、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体？需要诱导其脱分化的过程吗？ 不可以，因为高度分化的动物细胞的全能性受到抑制。 不需要诱导其脱分化。第17页，共33页。原代培养定义：把第1代细胞的培养与10代以内的细胞培养统称为原代培养。过程：从动物机体中取出组织 ? 剪碎 ? 加胰蛋白酶? 细胞游离 ? 加培养液 ? 将细胞接种到培养瓶内 ? 培养（1—2天换一次培养液）? 细胞贴壁生长 ? 长成单层细胞取材（动物组织） →细胞分散→初次培养第18页，共33页。传代培养定义：当原代培养的细胞生长停止，这时如果要使细胞继续生长，就要及时用胰蛋白酶等，使细胞从瓶壁上解离下来，然后加入新的培