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大肠系统小量表达蛋白的操作指南
1,第一天 9:00:挑一个单克隆到 1.5ml LB〔K+〕液体培育基中〔试管中〕,37℃, 200rpm 培育。
2,培育至 OD=0.6~0.8,IPTG 诱导〔3ulIPTG/支试管〕,37℃,200rpm 培育 2h。
3,收菌:取5 只 1.5ml 的 EP 管,每管参加 1ml 菌液,13000rpm,离心 1min,取 1 管弃上清,沉淀用30~100ul 10mM Tris-HCl〔pH8.0〕溶液吹散〔参加缓冲液的量视菌体量而定〕,参加与缓冲液等体积的 2×溴酚蓝 Buffer,100℃煮 5min,电泳。另 4 支管的沉淀,共用 400ul
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