诊断酶学自编.ppt

第 二 节 酶测定技术 二 、酶质量测定 （一）免疫化学法测定酶质量的原理 1、放射免疫测定（RIA） 将放射性核素标记的酶分子与相应的抗体 作用产生沉淀，再将沉淀分离进行定量测定。 例：用RIA检测尿中五项蛋白：β 2 -MG、 IgG、Alb、THP、α 1 -MG 诊断早起肾病。 第六十三页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 二 、酶质量测定 （一）免疫化学法测定酶质量的原理 2、其它方法： （1）免疫抑制法 常用于同工酶的测定。 例如：CK-M抗体检测CK-MB的活性。 第六十四页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 二 、酶质量测定 （一）免疫化学法测定酶质量的原理 2、其它方法： （2）化学发光免疫测定（CLIA） 将高灵敏度的化学发光测定技术与免疫 法相结合的一项技术。 第六十五页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 二 、酶质量测定 （一）免疫化学法测定酶质量的原理 2、其它方法： （3）酶免疫测定（EIA） 将酶催化作用的高效性与抗原抗体反应的 特异性结合的一种微量分析技术。 酶联免疫吸附实验（ELISA） 酶免疫组化技术 第六十六页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 二 、酶质量测定 （一）免疫化学法测定酶质量的原理 2、其它方法： （4）荧光免疫测定（FEIA） 是将抗原抗体反应的特异性和敏感性与显微示踪技术相结合的测定方法。 标记物：荧光素 第六十七页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 二 、酶质量测定 （二）酶质量免疫化学测定法的优点 1、灵敏度高 2、特异性高 3、能用于测定一些无活性的酶蛋白 4、应用于同工酶的测定 第六十八页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 二 、酶质量测定 （三）免疫化学测定法的局限性 1、制备足够量的提纯酶做为抗原或制备具有 免疫化学性质的抗血清比较困难。 2、测定繁琐 3、测定成本高 第六十九页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 三、同工酶的检测 第七十页，共九十九页，2022年，8月28日 第一节 概 述 三、工具酶 （四）代谢物浓度的酶法测定技术 1、终点法（end-point assay） （4）终点法实验设计的考虑因素 ①工具酶的特异性 高特异性 ②Km大小合适：在保证测定线性的前提下，Km值要尽量小。 第三十一页，共九十九页，2022年，8月28日 第一节 概 述 三、工具酶 （四）代谢物浓度的酶法测定技术 1、终点法（end-point assay） （4）终点法实验设计的考虑因素 ③酶的用量：酶的用量足够大，保证反应在较短的时间内完成。 ④工具酶中的杂酶应低于允许限制。 ⑤反应平衡点：保证反应朝正反应方向进行 ⑥附加剂：反应中添加的附加剂不抑制酶的活性，不影响试剂稳定性，不与底物或反应液中的物质发生作用。 第三十二页，共九十九页，2022年，8月28日 第一节 概 述 三、工具酶 （四）代谢物浓度的酶法测定技术 2、动力学法（定时法）： （1）定义：根据固定时间内底物消耗量和产物生成量计算酶的活性。 （2）原理：当酶促反应为一级反应时，反应速度V=K〔S〕。此时测定酶促反应的初速度，根据标准浓度法即可求得待测物的浓度。 第三十三页，共九十九页，2022年，8月28日 第一节 概 述 三、工具酶 （四）代谢物浓度的酶法测定技术 2、动力学法（定时法）： （3）条件：实际操作中在底物浓度消耗小于5%时即可采用该方法。 第三十四页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 通过本节的学习掌握如下知识： 1、血清酶活性浓度测定技术有哪些？ 2、酶活性浓度定量系数K值的计算与实验室的应用。 3、临床酶学测定的标准化要求和临床意义。 4、酶活性浓度单位？目前通用的酶单位的表示方法有哪些？ 5、酶质量免疫化学测定法的原理和优缺点 6、同工酶分析方法及原理 第三十五页，共九十九页，2022年，8月28日 第 二 节 酶测定技术 定时法 酶活性测定 连续监测法 酶学测定方法 酶质量测定：