质粒DNA的提取与电泳检测.ppt

实验三

质粒DNA的提取与电泳检测2010.10一、试验原理1.质粒概述:质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中染色体以外的脱氧核糖核酸(DNA)分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中染色体以外的DNA分子。在基因工程中质粒常被用做基因的载体。2。质粒DNA的提取：已经提出过许多方法用于从细菌中提纯质粒DNA，这些方法都含有以下3个步骤：

◆细菌培养物的生长。

◆细菌的收获和裂解

◆质粒DNA的纯化。?

二.实验目的：1.学习分子生物学常用仪器的操作2.通过质粒DNA的提取和检测，掌握使用碱变性法提取质粒以及用凝胶电泳分离鉴定质粒DNA的方法。三.试剂:◆溶液Ｉ

50mmol/L葡萄糖

25mmol/LTris．Cl(pH8.0)

10mmol/LEDTA(pH8.0)◆溶液Ⅱ（实验时现场配置）

10mol/LNaOH

10%SDS◆溶液Ⅲ

5mol/Ｌ乙酸钾60ml

冰乙酸11.5ml

水28.5ml◆异丙醇◆无水乙醇TE溶液四.试验步骤:(1)培养细菌:大肠杆菌接种到LB培养基2ml-5ml中,37度振荡bg培养8-16小时.(2)取培养液1.5ml于Eppendorf管中,12000rpm离心5分钟,去掉上清液.加入300ul溶液Ｉ,充分吹打混匀后,室温放置5分钟.(3)加入300ul新配置的溶液Ⅱ（统一配置使用：20ul10mol/lNaOH+20ul10%SDS,蒸馏水稀释至4ml）,颠倒5-10次,零下20度放置5分钟.(4)加入300ul溶液Ⅲ,颠倒5-10次,放置5分钟.(5)12000rpm离心15分钟,取上清液（不大于700ul）于一新的Eppendorf管.加入等体积异丙醇,混匀后放置3分钟,12000rpm离心10分钟,弃去上清.(6)用无水乙醇清洗一次,离心管倒置在吸水纸上,自然干燥.(7)加入20ulTE溶液溶解提取物,充分溶解.(8)琼脂糖凝胶电泳检测提取结果.五、试验结果六、结果分析思考题:1.实验中每一步的作用和目的是什么?2.电泳结果出现几个条带?各是什么?**