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试验二质粒DNA电泳鉴定课件

CATALOGUE目录质粒DNA提取电泳鉴定结果分析注意事项

质粒DNA提取01

提取质粒DNA的基本原理是利用质粒在宿主细胞内的复制和分离，通过物理或化学的方法将质粒从宿主细胞中释放出来，并进行纯化，得到高纯度的质粒DNA。质粒DNA提取通常包括细胞裂解、质粒DNA的分离和纯化、以及质粒DNA的定量和定性分析等步骤。实验原理

含有质粒DNA的细菌细胞宿主细胞溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、氯化铯溶液、乙醇、异丙醇等试剂离心机、电泳仪、凝胶成像系统等仪器实验材料

细胞收集将宿主细胞收集至离心管中，离心去除培养基。分离质粒DNA将裂解液加入氯化铯溶液中，离心后取上清液，即为质粒DNA粗品。电泳鉴定将质粒DNA进行琼脂糖凝胶电泳，用凝胶成像系统观察并记录结果。细胞培养将宿主细胞在适宜的培养基中培养至对数生长期。细胞裂解加入溶液Ⅰ和溶液Ⅱ，混合均匀后加入溶液Ⅲ，使细胞裂解。纯化质粒DNA将质粒DNA粗品进行乙醇沉淀和异丙醇沉淀，离心后取沉淀，用适量的TE缓冲液溶解，即为高纯度质粒DNA。010203040506实验步骤

电泳鉴定02

聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）原理聚丙烯酰胺凝胶由单体丙烯酰胺和交联剂N，N-甲叉双丙烯酰胺聚合而成，通过凝胶孔径的调节，实现对不同大小DNA分子的分离。实验原理质粒DNA经限制性内切酶酶切后，通过电泳分离，根据DNA片段的大小和电荷性质进行分离，从而确定质粒DNA的分子量。实验原理

实验材料限制性内切酶染色液如EcoRI、HindIII等。溴酚蓝、甲叉双丙烯酰胺等。质粒DNA样本电泳缓冲液丙烯酰胺待鉴定质粒DNA样本。Tris-HCl、硼酸等。用于制备凝胶。

酶切电泳染色结果观察实验步待鉴定质粒DNA样本与限制性内切酶混合，进行酶切反应。将酶切后的质粒DNA加入聚丙烯酰胺凝胶孔中，进行电泳分离。电泳结束后，将凝胶放入染色液中进行染色，以便观察DNA条带。通过观察染色后的凝胶，可以确定待鉴定质粒DNA的分子量大小。

结果分析03

拖尾或弥散可能是由于DNA降解或杂质污染造成的，这表明实验结果不理想。判断是否出现拖尾或弥散现象通过对比标准品或已知大小片段的DNA，判断所提取质粒DNA的大小是否符合预期。判断条带位置是否正确条带的亮度可以反映DNA的浓度，进而评估提取的质粒DNA的纯度和量。判断条带亮度理想的电泳结果应具有清晰的背景，无明显杂质或染色剂残留。判断背景清晰度结果判断

结果分析分析条带亮度与质粒DNA浓度之间的关系通过对比不同条带的亮度，可以大致推断出各条带对应的质粒DNA浓度。分析提取质粒DNA的纯度根据电泳结果中是否存在其他杂质或染色剂残留，评估所提取质粒DNA的纯度。分析质粒DNA的大小分布通过对比标准品或已知大小片段的DNA，分析所提取质粒DNA的大小分布情况。分析实验结果与预期的符合程度将实验结果与预期进行比较，分析实验结果是否符合预期，并找出可能存在的问题和改进方向。

注意事项04

实验操作应在安全柜中进行，防止质粒DNA污染环境。使用一次性手套和实验服，避免交叉污染。实验结束后，应按照实验室规定正确处理废弃物。安全注意事项

电泳槽温度、电压波动或缓冲液浓度变化可能导致电泳结果不准确。电泳条件不稳定样品处理不当操作不规范质粒DNA提取过程中可能引入杂质或降解，影响电泳结果。如加样不准确、点样位置偏离等，可能导致实验误差。030201实验误差来源

采用标准品进行质粒DNA质量检测，确保实验准确性。重复实验或采用不同的鉴定方法进行结果验证，提高实验可靠性。定期校准电泳设备，确保电泳条件稳定。实验质量控制

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