抗中性粒细胞胞浆抗体的检测及临床意义.docx

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抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA) 检测及临床意义

――间接荧光免疫(IIF)方法（欧盟）

一、ANCA概念及分类

抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。

目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为 ANCA 的靶抗原，蛋白酶

3(PR3)，髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(CathG)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。

根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型：

一种胞浆型（c-ANCA），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光，细胞核无荧光。在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。其主要的靶抗原是蛋白酶3(PR3)。

另一种是核周型（p-ANCA），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。由多种抗原引起，主要靶抗原是髓过氧化物酶(MPO)，人白细胞弹性蛋白酶(HEL)，乳铁蛋白(LF)，组织蛋白酶G(CathG)，杀菌/通透性增强蛋白(BPI)，人溶酶体相关膜蛋白2(H-LAMP2)，溶菌素(LYS)等。不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。抗MPO抗体产生的p-ANCA因耐甲醛，其荧光模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的c-ANCA类似故叫甲醛抗性的p-ANCA。而其他非MPO抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现，这种类型又称为甲

醛敏感的p-ANCA。故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判定ANCA的靶抗原PR3，MPO，非MPO三类。

二、ANCA的检测

间接荧光免疫方法是检测ANCA的参考方法或者标准方法，至今也是最常用的经典方法。IIF是区分c-ANCA和p-ANCA的基础，有较高敏感性，可半定量，但IIF测定的是总ANCA，不能准确区分靶抗原，需特异性的检测方法作为补充。

由于多种免疫性疾病患者存在ANA，用IIF法检测ANCA时，会产生干扰实验结果的判断。为避免干扰现象，采用了四基质联合的检测即：乙醇固定的粒细胞；甲醛固定的粒细胞；Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞。基质片各细胞分布及意义如表一所述。ANCA荧光模型及表现如表二所述。

表一：四联基质片分布及意义

表二：ANCA荧光模型及表现

荧光表现

荧光模型 乙醇固定粒细

胞

甲醛固定粒细

胞

Hep-2细

胞

猴肝细胞

胞质呈现弥散

的细颗粒荧光，

胞质呈现弥散

的细颗粒荧光，

肝细胞本身无荧

光。

c-ANCA阳 胞质荧光清晰 胞质荧光清晰

甲醛抗仅性肝p血-A窦NC粒A细：胞抗

性 勾勒出核的轮 勾勒出核的1：轮判断阴性MPO

抗出体现耐荧甲光醛。，其荧

廓，分页核之间 廓，分页核c-之AN间CA， 光与在乙醇固定的中性

区分ANA的干荧扰光：增强H。ep-2

Hep-2细胞甲有典呈型荧现光核周细胞胞质

荧甲光醛增固强。2：区分

胞质定呈现弥p-A散NCA

粒细胞中的c-ANCA类

似 肝脏细胞本身无

A 表醛现，

平滑丝状带荧

的粒细细颗胞粒荧对光甲，醛敏

甲醛敏荧感光p。-ANCA：其

N

耐 光。荧光阳性的

A

受 胞质主要集中

阴

p-A 在分页核周围，

胞质荧光清感还晰是耐勾勒出核的轮受

廓，分页核之间

他非M仅P肝O血抗窦体粒不细与胞甲阴性醛固定出的现中荧性光粒。细胞反

应，无荧光表现

性区分p-ANAN与CAN形CA成：借环状或不

助猴C肝A细胞A和其中规的则肝的块状。

荧光增强。是标准实验基质。

区分两种荧光模型：c-ANCA；

血窦阳粒性细胞甲。

呈现核周猴胞肝质

乙醇固

p-ANCA。 肝脏细胞本身无

ANCA 阳性醛，只平有肝滑血丝状细带胞荧

窦粒细胞出敏现荧光。荧如光阳性的

果两者同时感阳性，胞所质有主要集中肝细胞核都p有-A荧光在。分页核周围，

定

粒细胞阴性 阴性

荧光。

仅肝血窦粒细胞出现荧光。

NCA

ANCA阴性

形成环状或不规则的块状。

细胞核阳性，荧

阴性

细胞核呈 肝细胞核阳性。现荧光表 肝血窦粒细胞未

光强度增强

A

荧光表现如

现，如

ANA所述细胞核呈

见荧光。

甲醛耐受

N

细胞核阳性，荧 c-ANCA阳性，

现荧光表 肝细胞和肝血窦

p-ANCA阳

A

性

阳

性

光强度增强 乙醇，甲醛固定

粒细胞所述

现，如

A