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ChemiDocXRS+化学发光凝胶成像仪的应用
一、实验流程:
1、实验前需提前半小时打开冷CCD镜头的开关,打开仪器的开关,最后打开软
件。
2、实验时先将抽屉拉开放置核酸凝胶或转印膜(若是蛋白凝胶需放在暗箱中的
白光板上,不用时白光板竖立卡好在暗箱中),关上抽屉,检查暗箱门是否
关好。确认好后,打开ImageLab软件,设置拍照程序,当选择不同凝胶拍
摄方法时,会提示滤光片的位置和使用激发光的类型(例如拍摄化学发光会
提示:无光源,无滤光片,此时滤光片的位置要调到“0档”),严格按照软
件中的提示操作。等拍照结束后保存拍照程序及最终生成的图片,便于后续
数据的分析及程序的再次调用。
普通核酸凝胶和蛋白质凝胶的成像步骤与GelDocXR+的操作一样,也可参
照《ImageLab中文操作指南》。
化学发光成像的拍摄方法如下:
()在凝胶成像()对话框中选择(化学发光)应用程序
1GelImagingCemi
()在成像区域()对话框中的下拉菜单里选择合适的样品大小
2ImagingArea
(非必需)
()选择成像曝光()方法可以人为估计曝光时间并手控设
3ImageExposure
定(),或者使用信号累积模式(,
ManualExposureSignalAccumulationMode
SAM)。
在建立一个化学发光的程序时最难的任务就是图像曝光的确定,因为您想获
得一个充分利用了相机大的动态范围的图像。过短的图像曝光时间可能使高于膜
背景的微弱信号不能被识别;过长的图像曝光时间能够使得某些条带饱和(也就
是说,超出了相机准确报告信号的能力)。
如果这是您第一次用CemiDocXRS+分析化学发光样品,您需要在使用手
控或信号累积模式()之前决定一个合适的成像时间框架。获得这个信息
SAM
的最好的方式是取得一个相对短的手工曝光并利用ImageLab里的工具估计最
适的曝光时间。
手控曝光
1.选择手控设定曝光时间(Manuallyset
)并在读秒框中输入秒。
exposuretime10
2.选择Higligtsaturatedpixels。
3.把胶置于透射箱的中心位置。
4.在程序窗口中点击按钮。
5.在你的显示器上看样品的实时图像时,打开的成像仪的门并手工移动样品
直至它位于视野的中心区域。
6.如果必要的话,利用照相机的变焦滑板
调节成像区域的大小。
7.选择按钮获得你的第一个成像。
如果您所需的图像在计算机的显示器上出现,寻找图像中的不能定量的红色
的饱和区域。如果您看到了饱和区域,请重新用一个较短的时间成像。
如果没有饱和区域,移动鼠标置于最暗的条带之上。在较低的右下角Image
Lab窗口中看信号的强度值。在这个例子里,强
度为。这大约是照相机能记录的最大值的分之一(最大值为)。
19943265,535
用你的最初的秒曝光再乘以就可在照相机的最大动态范围附近成像你的
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