大肠菌群测定.ppt

关于大肠菌群测定大肠菌群的定义大肠菌群：一群在37℃，经24h能发酵乳糖，并产酸产气，需氧或兼性厌氧生长的革兰氏阴性的无芽孢杆菌。 其中包括有大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌）、肠杆菌属、枸橼酸菌属、克雷伯氏菌属中的一部分和沙门氏菌属的第Ⅲ亚属。P139第2页,共23页，2024年2月25日，星期天大肠杆菌的定义大肠杆菌指革兰氏阴性无芽孢杆菌、乳糖发酵产酸产气、IMViC试验（靛基质、MR、V-P、柠檬酸盐试验）为++--或-+--的细菌。大肠杆菌（也称大肠埃希氏菌），分类于肠杆菌科，归属于埃希氏菌属。与人类有关的大肠杆菌统称为致泻性大肠杆菌，包括五种：肠毒素性大肠杆菌（ETEC）、致病性大肠杆菌（EPEC）、出血性大肠杆菌（EHEC）、侵袭性大肠杆菌（EIEC）、黏附性大肠杆菌（EAEC）。第3页,共23页，2024年2月25日，星期天大肠菌群和大肠杆菌的关系耐热大肠菌群的定义：能在液体乳糖培养基中35/37℃培养48h产酸产气，并在44.5℃培养24h产酸产气的细菌（依据ISO标准）第4页,共23页，2024年2月25日，星期天卫生学意义大肠菌群和大肠杆菌作为食品卫生标准的意义在于，是评价卫生质量的重要指标，作为食品中的粪便污染指标。另外，肠道致病菌如沙门氏菌属和志贺氏菌属等，对食品安全性威胁很大。经常检验致病菌有一定困难。而食品中的大肠菌群较容易检出，肠道致病菌与大肠菌群的来源相同，而且在一般条件下大肠菌群在外环境中生存时间也与主要肠道致病菌一致．所以大肠菌群的另一重要食品卫生意义是作为肠道致病菌污染食品的指示菌．大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。第5页,共23页，2024年2月25日，星期天大肠杆菌的生物学特性基本形态：此菌为两端钝圆的短小杆菌，一般约0.5-0.8μm*1.0-3.0μm，多单独存在或成双，但不呈长链排列。约50%的菌株有周生鞭毛，但多数只有1-4根，一般不超过10根，故菌体动力弱。多数菌株有菌毛，有的有荚膜或微荚膜，不形成芽孢，对普通碱性染料着色良好，革兰氏染色阴性。第6页,共23页，2024年2月25日，星期天大肠杆菌的生物学特性培养特性：大肠杆菌合成代谢能力强，在含无机盐、铵盐、葡萄糖的普通培养基上生长良好。最适生长温度为37℃，在42-44℃条件下仍能生长，生长温度范围15-46℃。在普通营养琼脂上有3种菌落形态：1）光滑型：菌落边缘整齐，表面有光泽、湿润、光滑、呈灰色，在生理盐水中易分散；2）粗糙型：菌落扁平、干涩、边缘不整齐，易在生理盐水中自凝；3）黏液型：常为含有荚膜的菌株。第7页,共23页，2024年2月25日，星期天 食品中大肠菌群数是以每100mL（g）检样内大肠菌群最近似数（MPN）表示。大肠菌群数的定义第8页,共23页，2024年2月25日，星期天P142第9页,共23页，2024年2月25日，星期天GB/T4789.3-2010大肠菌群初发酵复发酵24±2h~48±2h大肠菌群MPN计数法操作步骤第10页,共23页，2024年2月25日，星期天实验材料检测样品：奶粉设备和材料：恒温培养箱、天平、摇床、无菌移液管（1ml）、无菌锥形瓶、无菌试管、小倒管、精密pH试纸培养基和试剂：LST肉汤、BGLB肉汤、无菌生理盐水、1mol/LNaOH、1mol/LHCl第11页,共23页，2024年2月25日，星期天实验步骤：前期准备每个小组准备器材：移液管1mlX6、10mlX2、锥形瓶500mlX2、试管X14准备试剂：配制：LST肉汤（1000ml）和BGLB肉汤生理盐水（500ml）第12页,共23页，2024年2月25日，星期天相关配方第13页,共23页，2024年2月25日，星期天相关配方生理盐水：8.5g+1000ml蒸馏水（一锥形瓶瓶装225ml，剩下的装在另外一个锥形瓶中）第14页,共23页，2024年2月25日，星期天将相关玻璃仪器进行灭菌前包装将配制好的LST肉汤加入试管中（注意1），然后小心将小倒管放入肉汤中（注意2）（每组10支）将所有东西包扎好放入灭菌锅中灭菌20min实验步骤：前期准备第15页,共23页，2024年2月25日，星期天实验步骤：检样稀释称取25g样品→加入225ml生理盐水中→摇床匀质→制成1:10样品匀液取一支无菌试管+9ml生理盐水→+1ml1:10样品→制成1:100稀释液如2方法制成1:1000稀释液