Omega真菌RNA提取试剂盒R6840说明书(中文翻译版).pdfVIP

实验概要

Omea真菌RNA提取试剂盒中文说明书(E.Z.N.A.FungalRNAKit)。

实验前准备

高速离心机、无核酸酶的微量离心管（灭菌管）、β巯乙醇、无水乙醇、液氮（冷冻破碎样

DEPCEP-/

品）、灭菌的研钵、℃预热的水（每个样品μ）。

65DEPC100l

实验前要用DEPC浸泡过夜并高压灭菌的东西有：蓝枪头、黄枪头、白枪头、5ml枪头及各枪头盒，小瓶

（用来装乙醇等），管、玻棒、纱布（用来过滤菌丝）。研钵用锡纸包裹℃烘箱。

EP1806h

1.取适量RB裂解液，按1ml裂解液加入20ul2-疏基乙醇。该混合液可于室温放置一周。

2.用DEPC水配置一小瓶70%乙醇。

3.按下表用无水乙醇稀释RNAWashBufferII，并于室温保存。

R6840-00:加入8ml无水乙醇

R6840-01:加入48ml无水乙醇

R6840-02:每瓶加入48ml无水乙醇

实验步骤

1.称取50-100m经液氮研磨成粉末状的真菌样品至1.5ml离心管，立即加入500ulRB/2-Me,剧烈

涡旋。

2.转移液体至匀浆柱（试剂盒中提供的绿色柱子）中。大于13,000×离心5min。

3.转移收集管中的上清(注意不要吸到沉淀)至新离心管，加入0.5倍体积无水乙醇或，涡旋混匀15秒。

这一步如果发现有沉淀用注射器吹打或上下震荡10-15次。一般可转移(450ul的上清液，可加入225ul

无水乙醇。这一步如果发现有沉淀用注射器吹打或上下震荡)10-15次。

4.把RNA柱套在新收集管，转移所有的混合液（即使有沉淀）至RNA柱子。室温10,000×离心30

秒，弃去滤液。如果出现堵柱现象，提高离心速度至14,000x。

(可选)膜上DNase消化:

1)加入300ulRNAWashBufferI至柱子中，按上柱条件离心，弃滤液；

2)配制DNase消化液(DiestionBuffer，73.5ul；RNase-FreeDNaseI，1.5ul)，混匀。

3)将上述消化液转移至柱子膜的正中央，不要将消化液转移至柱子内壁。

4)室温静置15分钟。

5.加入500ulRNAWashBufferI至柱子中，按以上条件离心，弃去滤液和收集管。

6.把柱子套在新2ml收集管（试剂盒提供），加入700ulRNAWashBufferII（经过无水乙醇稀释的）

至柱子，按以上条件离心弃去滤液。

7.把柱子套回收集管，加入500ulRNAWashBufferII至柱子重复第6步，按以上条件离心弃去滤液。

全速离心空柱1min以上甩干柱子质。

注意：不要忽略此步――这对从柱子上除去乙醇至关重要。

8.RNA的洗脱。把柱子装在干净的1.5ml离心管上（自备），加入50-100ulDEPCWater（试剂盒提

供）直接到柱子质上室温静置。离心洗脱出。如果期望的量较大（＞

2min10,000x1minRNARNA

50μ）可以进行第二次洗脱。