多底物酶促反应动力学.ppt

判别乒乓机制问题：A PBQE (EA—EP) F (EB---EQ)EGluα-酮戊二酸丙酮酸AlaE(E-Glu-F-α-酮戊二酸)F(F-丙酮酸-F-Ala)E第六章多底物酶促反应动力学第32页,共50页，2024年2月25日，星期天 第六章多底物酶促反应动力学第33页,共50页，2024年2月25日，星期天Cleland判断有序和随机机制，其反应历程如下：

第六章多底物酶促反应动力学第34页,共50页，2024年2月25日，星期天 第六章多底物酶促反应动力学第35页,共50页，2024年2月25日，星期天规律总结如下：1[A]固定底物，[B]变化底物，[p]=0,[Q]=常数2[A]固定底物，[B]变化底物，[p]=常数,[Q]=01[B]固定底物，[A]变化底物，[p]=0,[Q]=常数2[B]固定底物,[A]变化底物，[p]=常数,[Q]=0第六章多底物酶促反应动力学第36页,共50页，2024年2月25日，星期天3.同位素交换法下面简单阐述同位素交换法在研究多底物动力学上的应用。先举一个例子： 蔗糖磷酸化酶葡萄糖-1-P+果糖=======蔗糖+H3PO4这个反应是可逆反应。在没有果糖时，G-1-P可以与32P标记的KH232PO4发生交换，表明有下面的反应：Suc磷酸化酶G-1-P+32Pi========G-1-32P+Pi研究认为，这种现象是蔗糖磷酸化酶的乒乓机制造成,转移葡萄糖基。第六章多底物酶促反应动力学第37页,共50页，2024年2月25日，星期天 第六章多底物酶促反应动力学第38页,共50页，2024年2月25日，星期天反应1没有果糖，加入G-1-32P，产生32P反应2如果有EG存在，没有G-1-P，可以通过2方式的Fru发生交换。下面是一个通式：第六章多底物酶促反应动力学第39页,共50页，2024年2月25日，星期天当一个底物不存在，另一个底物可与其相应产物发生同位素交换，这是乒乓机制的特点。第六章多底物酶促反应动力学标记的被转移的基团G外，Y或者Gy不存在，标记的X和GX一样可以发生同位素交换；当没有X或者GX时，标记的Y和GY也可以发生同位素交换。也可区分有序和随机机制同位素交换对于顺序机制来说，必须两个底物都结合到酶的中心复合物上。所以一个底物不存在，另一个底物就不可能和产物发生同位素交换。这就是与乒乓机制不同的地方。且可区分有序和随机机制第40页,共50页，2024年2月25日，星期天方法：在酶促反应达到化学平衡情况下，加入不足以改变平衡的极少量放射性底物，由于化学平衡是一个动态平衡，虽然底物的浓度、产物的浓度保持恒定，但是加入的标记底物必定有变为产物的可能性。加入标记物测混合物中标记产物放射性强度,算出同位素交换速度keq=kf/kr=[P][Q]/[A][B]再测定不同非标记底物浓度对交换速度的影响?看高浓度的非标记底物能否抑制标记底物的同位素交换。第六章多底物酶促反应动力学第41页,共50页，2024年2月25日，星期天可以看出是否是有序还是随机机制#为保持两者比