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猕猴桃无病毒种苗生产技术规程

Technicalcodefortheproductionofvirus-freekiwifruitstock

1适用范围

本标准规定了猕猴桃病毒脱除方法、病毒检测方法、脱毒种苗保存与繁殖。

本标准适用于猕猴桃脱毒种苗繁育及猕猴桃病毒检测。

2术语和定义

下列术语和定义适用于本标准。

2.1茎尖培养脱毒Viruseliminationbyshoottipculture

切取0.2~0.5mm带毒试管苗茎尖，经组织培养获得无病毒植株的过程。

2.2茎尖超低温疗法脱毒Viruseliminationbyshoottipcryotherapy

切取1.0~2.0mm带毒试管苗茎尖，经液氮处理后进行组织培养获得无病毒植株的过程。

2.3热疗法结合茎尖培养脱毒Viruseliminationbythermotherapycombinedwith?shoottipculture

先对带毒试管苗进行热处理，热处理结束后取茎尖进行茎尖培养获得无病毒植株的过程。

2.4化疗法结合茎尖培养脱毒Viruseliminationbychemotherapycombinedwith?shoottipculture

先将带毒试管苗置于含抗病毒药物的培养基中培养，培养结束后取茎尖进行茎尖培养获得无病毒植株的过程。

2.5热疗法结合茎尖超低温疗法脱毒Viruseliminationbythermotherapycombinedwith?shoottipcryotherapy

先对带毒试管苗进行热处理，热处理结束后取茎尖进行超低温处理，最后经组织培养获得无病毒植株的过程。

2.6化疗法结合茎尖超低温疗法脱毒Viruseliminationbychemotherapycombinedwith?shoottipcryotherapy

先将带毒试管苗置于含抗病毒药物的培养基中培养，培养结束后取茎尖进行超低温处理，最后经组织培养获得无病毒植株的过程。

2.7化疗法结合热疗法和茎尖培养脱毒Viruseliminationbychemotherapycombinedwith?thermotherapyandshoottipculture

先将带毒试管苗置于含抗病毒药物的培养基中培养，之后进行热处理，热处理结束后取茎尖进行组织培养获得无病毒植株的过程。

2.8热疗法结合化疗法和茎尖超低温疗法脱毒Viruseliminationbythermotherapycombinedwith?chemotherapyand?shoottipcryotherapy

先将带毒试管苗置于含抗病毒药物的培养基中培养，之后进行热处理，热处理结束后再取茎尖进行超低温处理，最后经组织培养获得无病毒植株的过程。

2.9无病毒母株virus-freemotherplant

通过病毒脱除处理或直接筛选获得的、经检测并确认不携带本文件规定的病毒的植株。

2.10无病毒苗木virus-freeseedling

未携带有本文件规定的病毒的猕猴桃苗木。

2.11无病毒母本园virus-freemotherblock

用于提供猕猴桃无病毒母株保存的圃地。

3脱毒原理

病毒在植物体内分布不均匀，植物茎尖顶端分生组织中的病毒含量较低甚至不含病毒，热处理及抗病毒药物处理能够抑制病毒RNA的合成，因此可通过茎尖培养，或结合热疗及化疗对植物病毒进行脱除；在茎尖超低温疗法脱除植物病毒中，茎尖经过冷冻保护处理后转入液氮中冷冻时，分化程度较低、核质比大、自由水含量较低的茎尖顶端分生组织和幼嫩叶原基细胞更容易存活。由于很多病毒无法侵入茎尖顶端分生组织，因此无病毒的顶端分生组织可以在液氮冷冻后存活并再生为无病毒植株。

4病毒检测与脱除

4.1病毒种类

病毒种类见表A.1。包括猕猴桃病毒A（ActinidiavirusA，AcVA）、猕猴桃病毒B（ActinidiavirusB，AcVB）、猕猴桃种传潜隐病毒（Actinidiaseedbornelatentvirus，ASbLV）、猕猴桃黄化环斑病毒（Actinidiayellowingringspotvirus，AYRSpV）、猕猴桃病毒1（Actinidiavirus1，AcV-1）、猕猴桃黄化病毒1（Actinidiayellowingvirus1，AcYV1）、猕猴桃黄化病毒2（Actinidiayellowingvirus2，AcYV2）、苹果茎沟病毒（Applestemgroovingvirus，A