基因分型检测试剂盒常见问题.ppt

HPV基因分型检测试验项目

——临床试验结果分析及常见问题

第41页,共58页，2024年2月25日，星期天临床试验结果分析及常见问题HPV阳性正常结果HPV阴性正常结果第42页,共58页，2024年2月25日，星期天临床试验结果分析及常见问题一、杂交结果中IC点不清楚，同时阳性点也不清楚或比较淡；可能原因：①杂交温度控制不当，出现非特异性杂交点；②DNA样本中有对PCR反应的抑制物质，影响了PCR扩增的效率；③确保PCR产物完全变性成单链，如有必要，在使用前再次变性PCR产物。④病人样本是否取样前是否违反了取样要求？将DNA样本稀释10倍后，重新PCR扩增及杂交反应可解决。第43页,共58页，2024年2月25日，星期天临床试验结果分析及常见问题二、杂交结果中，在杂交膜上既无IC点，也没有HPV分型阳性点显色；可能原因：①可能是因为DNA模板中存在抑制PCR反应的抑制物质，首先,通过抽提得到的DNA的纯度对PCR反应会有很大影响,所以必须在做PCR模板的时候将其稀释从而降低DNA溶液中抑制剂的浓度,使得PCR反应能正常进行，在一家新的医院开始试验的时候均需要摸索本院样本自身的特点。②或者所取样本，不符合凯普HPV分型检测说明书中对样本的要求，样本之前经过碘染色或者病人使用了阴道冲洗药物，均会对PCR反应产生抑制。③确保PCR产物完全变性成单链，如有必要，在使用前再次变性PCR产物。如果这些情况的时候，建议对样本稀释10倍重新PCR，然后杂交，结果仍然不成功的情况下，建议按照凯普说明书要求重新取样检测。第44页,共58页，2024年2月25日，星期天临床试验结果分析及常见问题402721403022403040403078稀释1:10DNA模板重复PCRHPV58HPV18IC(+)HPV51弱IC,HPV52第45页,共58页，2024年2月25日，星期天临床试验结果分析及常见问题三、杂交结果中IC点没有，同时阳性点淡或不清楚；可能原因：①样本中含有抑制PCR反应的物质；②样本中HPVDNA浓度较低，同样本中含有抑制PCR反应的物质；③病人样本不符合凯普分型试验要求，样本本身为阴性结果，但因为样本中有抑制PCR反应的物质，同时操作人员对杂交温度又控制不当，出现非特异性杂交点；建议增加用于扩增DNA浓度，重新PCR扩增及杂交反应。第46页,共58页，2024年2月25日，星期天临床试验结果分析及常见问题四、IC点弱或者没有，但HPV分型阳性点显色正常可能原因：①由于IC和HPVDNA之间存在竞争，高浓度的HPVDNA可能会对IC点的扩增反应产生竞争性抑制，此现象出现时如HPV分型点显色正常，则认为分型结果正确。第47页,共58页，2024年2月25日，星期天临床试验结果分析及常见问题六、Biotin（生物素）点不显色可能原因：①请确认所使用试剂是否仍在有效期内。尤其是酶标液及显色液是否按要求使用及储存。②确定实验操作是否严格按照说