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11.7

酵母双杂交

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酵母双杂交(Yeasttwo-hybrid)

酵母双杂交是利用转录因子Gal4构建酵母细胞报告基因系统来检测

两个蛋白质在体内是否相互作用的实验技术。

原理是：利用酵母Gal4转录因子的特异增强子UAS序列在酵母细胞

内构建报告基因系统，并将Gal4转录因子的DNA结合结构域BD和激

活结构域AD拆开，分别与蛋白质X和蛋白质Y构建融合蛋白载体。两

个载体分别单转酵母细胞，报告基因不会转录。但是当把两个载体

同时转入酵母细胞（即酵母双杂交），如果蛋白质X和蛋白质Y能相

互作用结合在一起，就会使得Gal4的BD结构域和AD结构域也结合在

一起，Gal4发挥激活活性，从而使报告基因转录。

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酵母Gal4转录因子工作原理

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酵母双杂交的BD和AD载体的构建

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Gal4因子BD和AD载体的转化

(1)

(2)

(3)

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酵母双杂交的应用

利用酵母双杂交确定蛋白质CmUVR8和CmCOP1的互作，UVB能促进这

种结合。蓝色菌落为阳性菌落

图片来源：FrontiersinPlantScience,2018年7月，9:955

2018湖南师范大学生命科学学院

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