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水质19种藻毒素的测定液相色谱-串联质谱法

范围

本文件规定了测定水中19种藻毒素的液相色谱-串联质谱法。

本文件适用于地表水和海水中19种藻毒素的测定。

当取样量为1L，定容体积为1.0mL，进样体积为10μL时，19种藻毒素的方法检出限为0.8ng/L～3ng/L，测定下限为3.2ng/L～12ng/L。详见附录A。

规范性引用文件

本文件引用了下列文件或其中的条款。凡是注明日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是未注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

HJ91.2地表水环境质量监测技术规范

HJ442.3近岸海域环境监测技术规范第三部分近岸海域水质监测

HJ493水质样品的保存和管理技术规定

GB17378.3海洋监测规范第3部分：样品采集、贮存与运输

方法原理

水中的藻毒素经固相萃取柱富集，用液相色谱-串联质谱分离检测，通过保留时间和特征离子丰度比进行定性，外标法定量。

干扰与消除

金属离子与部分目标化合物能形成络合物，使固相萃取效率降低，可通过向水样中加入乙二胺四乙酸二钠抑制络合物的形成，从而消除干扰。

试剂和材料

除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的色谱纯试剂，实验用水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯。

5.1.2乙腈（CH3CN）：色谱纯。

5.1.3甲酸（CHOOH）：色谱纯。

5.1.4甲酸溶液（0.1%）：移取1mL甲酸（5.1.3）溶于1000mL实验用水中。

5.1.5甲醇-水（2+8）溶剂：甲醇（5.1.1）和实验用水按照2：8的体积比混合，摇匀。

5.1.6含0.1%甲酸的甲醇-水（2+8）溶剂：取1mL甲酸（5.1.3）与999mL甲醇-水（2+8）溶剂（5.1.5）混合，摇匀。

5.1.7含0.1%甲酸的乙腈溶剂：取1mL甲酸（5.1.3）与999mL乙腈（5.1.2）混合，摇匀。

5.18标准贮备液

可直接购买有证标准溶液，也可用标准物质配制，标准物质纯度大于99.0%，用适量的甲醇（5.1.1）溶解。标准贮备液于-18℃以下冷冻、避光保存不超过6个月或参照制造商的产品说明。

5.1.9标准使用液

分别移取适量19种藻毒素的标准储备液（5.1.8），用甲醇（5.1.1）配制成为附录B表B.1中浓度的标准使用液，于-18℃以下冷冻、避光保存。

5.2材料

5.2.1乙二胺四乙酸二钠（Na2EDTA）：优级纯。

5.2.2固相萃取柱：填料为二乙烯苯和N-乙烯基吡咯烷酮共聚物（HLB）或等效萃取柱，规格为1g/20mL。

5.2.3针式微孔滤膜：0.22μm聚四氟乙烯滤膜（PTFE）或其他等效滤膜。

5.2.4滤膜：0.45μm玻璃纤维或其他材质等效滤膜。

仪器和设备

6.1液相色谱-三重四极杆质谱仪：配有电喷雾离子化源（ESI）。

6.2固相萃取装置：自动或手动，流速可调节。

6.3浓缩装置：氮吹浓缩仪或其他类型性能相当的设备。

6.4一般实验室常用仪器和设备。

样品

7.1样品采集和保存

7.1.1样品采集

按照HJ91.2、HJ442.3、HJ493和GB17378.3的相关规定进行样品采集。用预先洗涤干净并干燥的磨口棕色玻璃瓶采集水样，采样瓶要完全注满不留气泡。

7.1.2样品的保存

样品采集后应于4℃以下冷藏、避光运输，及时分析。若不能及时分析，应置于4℃以下冷藏、避光保存，保存期为3d。萃取液可置于-18℃以下冷冻保存，保存期为30d。

7.2试样的制备

7.2.1水样预处理

水样经0.45μm滤膜（5.2.4）过滤后，量取1000mL水样，加入0.5g的Na2EDTA（5.2.1），振荡至完全溶解，待富集净化。

7.2.2固相萃取法

将固相萃取柱（5.2.2）固定在固相萃取装置（6.2）上，分别用10mL甲醇（5.1.1）和10?mL实验用水活化，在活化过程中应保证柱头浸润。

将水样以6mL/min流速通过活化后的固相萃取柱，再用10?mL实验用水淋洗萃取柱，负压抽干。用12mL甲醇（5.1.1）洗脱富集后的小柱，收集洗脱液。将上述洗脱液浓缩（6.3）至干（注意保持液面微微波动），以含0.1%甲酸的甲醇-水（2+8）溶剂（5.1.6）定容至1.0mL，经0.22μm针式微孔滤膜（5.2.3）过滤，置于样品瓶中，待测。

7.3空白试样的制备

以实验用水代替水样，按照与试样的制备（7.2）相同的步骤，制备空白试样。

分析步骤

8.1仪器参考条件

8.1.1液相色谱参考条件

色谱柱：C18柱，柱长150mm，内径3