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实验三聚丙烯酰胺凝胶电泳

分离血清蛋白质

实验三

聚丙烯酰胺凝胶电泳

分离血清蛋白质

实验目的

n掌握盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理

n学习盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的操作技术

n了解盘状聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用

实验原理

聚丙烯酰胺凝胶电泳采用不连续系统

（即缓冲液成分、pH及凝胶孔径不连续）聚丙烯

酰胺凝胶电泳，通过浓缩效应、分子筛效应、电

荷效应，将血清中各蛋白质成份依其分子大小、

电荷多少不同而进行高效分离。

n聚丙烯酰胺凝胶（PAG）的聚合反应：

由单体聚丙烯酰胺(Acr)和甲叉双丙烯酰胺

(Bis)交联而成的三维网状结构凝胶。

Bis：交联剂

过硫酸铵(AP)：引发剂，提供自由基，

引发聚合反应

四甲基乙二胺(TEMED)：催化剂,加快引发

释放自由基的速度

n分离机制：

1.浓缩效应

Ø凝胶层孔径不连续：浓缩胶大孔径，分离胶小孔径

ØpH值不连续：电泳缓冲液pH=8.3；浓缩胶pH=6.7；

分离胶pH=8.9

-

Ø缓冲液离子不连续：电泳液中Gly(慢离子)；凝胶中

--

Cl(快离子)；Pr介于二者之间

Ø电位梯度不连续

成分pH值孔径

电泳缓冲液甘氨酸(慢离子)8.3

样品蛋白质6.7

-

浓缩胶Cl(快离子)6.7大

-

分离胶Cl(快离子)8.9小

有效迁移率=迁移率解离度

电泳时，氯离子

跑得最快，留下一段低电

导区，产生高电位梯度（

电位与电导率成反比），

使甘氨酸离子追赶氯离子，

蛋白质夹在中间而被压缩

2.分子筛效应

分子量或分子大小和形状不同的蛋白质通过

一定孔径分离胶时，受阻滞的程度不同而表现出不

同的迁移率

3.电荷效应

电荷量不同，迁移率不同。

实验仪器及试剂

n电泳装置

稳压电源盘状电泳槽

Ø毛细滴管

Ø刻度吸量管

Ø灯泡瓶

Ø玻璃管和橡胶帽

Ø微量移液器

Ø注射器和长针头

Ø脱色摇床

ØAcr和Bis：棕色瓶保存

ØTEMED-四甲基乙二胺，避光保存。

Ø过硫酸铵(新鲜配制)

Ø染色液：0.1％溴酚兰液

Ø洗脱液：7％醋酸

Ø其他试剂：见下表贮存液的配制。

贮存液100ml溶液中的含量pH工作溶液配制的体积比

1NHCl48.Oml；Tris36.6克分离胶制备：

1

TEMED0.23ml1份1号，2份2号，1份

8.9水；抽气后加