果蔬实验指导.doc

果蔬采后生理生化实验指导

曹建康，姜微波，赵玉梅编著

中国农业大学

目录

TOC\o1-3\h\z\u第一篇根本实验操作原理1

一、仪器的清洗、枯燥和保管1

二、称量3

三、取液与移液6

四、溶液的配制7

五、缓冲溶液的配制9

六、溶液pH值的测定14

七、离心技术15

八、分光光度技术17

九、样品的提取、别离、纯化和保存18

十、蒸馏水的要求22

十一、误差分析与数据处理23

第二篇果蔬采后生理生化实验技术28

一、果蔬一般物理性状的测定28

二、果实硬度的测定29

三、可溶性固形物含量的测定30

I．手持式折光仪测定法30

II．阿贝折光仪测定法32

四、可滴定酸含量的测定34

五、果蔬汁液冰点的测定36

六、果蔬组织含水量的测定37

七、叶绿素含量的测定38

八、抗坏血酸含量的测定40

I．2,6-二氯酚靛酚滴定法40

II．碘酸钾滴定法43

III．分光光度计法44

九、游离氨基酸总量的测定46

十、总酚物质、类黄酮与花青素含量的测定49

十一、果蔬呼吸强度的测定50

I．碱液吸收法51

II．气相色谱法53

十二、贮藏环境中O2和CO2浓度的测定55

十三、果蔬中可溶性糖含量的测定58

I．苯酚-硫酸法58

II．蒽酮试剂法60

十四、果蔬中复原糖含量的测定62

I．3,5-二硝基水杨酸法63

II．斐林试剂滴定法65

III．斐林试剂比色法68

十五、果蔬中可溶性蛋白质含量的测定70

I．考马斯亮蓝染色法70

II．紫外吸收法73

IV．Lowry法〔劳里法〕75

十六、果蔬中淀粉含量及淀粉酶活性的测定78

〔一〕淀粉含量的测定78

I．酸水解法78

II．碘-淀粉比色法80

〔二〕淀粉酶活性的测定82

十七、果胶物质含量及果胶酶活性的测定85

〔一〕咔唑比色法测定果胶物质含量85

〔二〕果胶酶活性测定88

I．比色法88

II．碘液滴定法91

III．粘度降低法93

十八、粗纤维素含量及纤维素酶活性的测定93

〔一〕粗纤维含量的测定93

〔二〕纤维素酶活性的测定95

〔三〕β-葡萄糖苷酶活性测定97

I．水杨苷水解法97

II．对-硝基苯葡萄糖苷水解法99

十九、果蔬中过氧化物酶活性的测定100

二十、果蔬中多酚氧化酶活性的测定103

二十一、果蔬中脂氧合酶活性的测定105

二十二、果蔬组织乙烯生物合成代谢的测定107

〔一〕乙烯释放量的测定107

〔二〕ACC含量的测定108

〔三〕ACC合成酶活性的测定111

〔四〕ACC氧化酶活性测定112

二十三、果蔬组织活性氧代谢的测定114

〔一〕超氧阴离子产生速率的测定114

〔二〕过氧化氢含量的测定116

〔三〕过氧化氢酶活性测定118

〔四〕超氧化物岐化酶活性测定120

二十四、果蔬组织抗氧化代谢的测定122

〔一〕复原型谷胱甘肽含量测定123

〔二〕谷胱甘肽复原酶活性的测定125

〔三〕抗坏血酸过氧化物酶活性的测定127

二十五、果蔬组织乙醇发酵代谢的测定129

〔一〕果蔬组织中乙醛、乙醇含量的测定130

Ⅰ.气相色谱法测定乙醛、乙醇含量130

Ⅱ.重铬酸钾氧化法测定乙醇含量131

〔二〕丙酮酸含量的测定133

〔三〕丙酮酸脱羧酶、乙醇脱氢酶活性的测定135

二十六、果蔬中苯丙氨酸解氨酶活性的测定137

二十七、果蔬中几丁质酶活性的测定139

二十八、果蔬中β-1,3-葡聚糖酶活性测定142

二十九、游离脯氨酸含量的测定145

三十、果蔬细胞膜渗透率的测定146

三十一、丙二醛含量的测定148

三十二、果蔬蛋白质SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳149

三十三、果蔬同工酶和可溶性蛋白质凝胶电泳154

附录158

附录1.常用缓冲溶液的配制方法158

附录2.实验室中常用酸碱的比重和浓度164

附录3.常用有机溶剂及其主要性质165

主要参考文献168

第一篇根本实验操作原理

一、仪器的清洗、枯燥和保管

仪器的清洗，是一项细致的实验准备工作，实验中所用的仪器清洁与否，洗涤是否符合要求，对实验结果的准确性和精确程度均具有直接的影响。在果蔬采后生理生化实验中，经常涉及到蛋白质、酶甚至核酸等多种具有生物活性的物质的测定和制备工作。这些物质对许多常见的污染杂质如金属离子〔钙、镁离子等〕、去污剂和有机物残基等十分敏感。由于实验仪器不洁净或被污染，往往会造成生化实验出现较大的误差，有时甚至导致实验的失败。因此，实验仪器、用具是否洁净就是非常重要的。

1．仪器的清洗

〔1〕初用玻璃仪器的清洗

新购置的玻璃仪器外表常附着有游离的碱性物质，可先用0.5%的去污剂洗刷，再用自来水