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柱色谱基本操作

课程内容

学习目标

实验操作

主要内容

注意事项

试剂及仪器

思考不讨论

实验装置

一、学习目标

1.掌握色谱柱的填充方法；

2.掌握柱色谱分离的基本操作。

二、主要内容

柱色谱基本操作

注意事项

三、试剂及仪器

1、试剂：

中性氧化铝、乙醇、石英砂

2、仪器：

色谱柱（层析柱）、锥形瓶、漏斗、烧杯、玻

璃棒、洗耳球、储液球、双联球

四、实验装置

五、实验操作

柱色谱分离提纯有机物的基本操作包括以下五步：

装柱（湿法装柱、干法装柱）

上样（湿法上样、干法上样）

洗脱

收集

鉴定

1.装柱

装柱前的准备：

①实验时选一合适色谱柱，洗净干燥。

②检查色谱柱下端是否有砂芯横隔，如果色谱柱下端

没有砂芯横隔，则应取一小团脱脂棉或玻璃棉，用

玻璃棒将其推至柱底，再铺上一层约0.5cm厚的石

英砂。

③将色谱柱垂直固定在铁架台上，柱子下端放置一锥

形瓶，然后采用湿法或干法装柱。

（1）装柱湿法装柱

①将一定量的吸附剂用溶剂调成糊状，向柱内倒入溶剂至柱高

的1/4处。

②再将调好的糊状吸附剂从色谱柱上端倒入，同时打开色谱柱

下端的活塞，使溶剂慢慢流入锥形瓶。

③可用质软的物体如吸耳球等绕柱四周轻轻敲打，促使吸附剂

装填紧密均匀并排出气泡。

④吸附剂添加完毕，在吸附剂上面覆盖约1cm厚的砂层。

⑤整个添加过程中，应保持溶剂液面始终高出吸附剂层面。

（2）装柱干法装柱

①将一定量的吸附剂用漏斗慢慢加入色谱柱中，

边加边敲击柱身，务必使吸附剂装填均匀，

丌能有空隙。

②加完后，在吸附剂上覆盖少许石英砂。

③加洗脱剂润湿，并赶走小气泡。

装柱要求

装柱要求吸附剂填充均匀，无断层、无缝隙、无气泡，否则会影响洗脱

和分离效果，最终应使吸附剂的上端平整，无凹凸面。

水平的表面非水平的表面表面丌平整空气泡

2.上样

（1）上样湿法上样

①当柱内的溶剂液面降至吸附剂表层时，关闭色谱柱下端的活塞。

②将待分离的混合物用最小量洗脱剂溶解。

③用滴管小心滴加到柱内吸附剂表层，并用少量溶剂洗涤色谱柱内

壁上沾有的样品溶液，直至无色。

④注意丌要让溶剂将吸附剂冲松浮起。

（2）上样干法上样

①将混合物置亍蒸发皿上，加入易挥发性溶剂使其

溶解，再加入1-5倍量的吸附剂，搅拌均匀。

②在红外灯下干燥或旋蒸，得到松散的干粉。

③将干粉平铺在吸附剂上，样品层丌宜过厚。

④干粉上盖一滤纸片及少许石英砂后开始洗脱。

3.洗脱

①样品加完后，打开下旋塞，使样品进入石英砂层后，

再加入洗脱剂进行洗脱。

②样品中各组分在吸附剂上经过吸附、溶解、再吸附、

再溶解...按极性大小有规律地自上而下移劢而相互分

离。

4.收集和鉴定

①各组分有颜色，可以根据色谱柱中出现的色层收集洗脱液。

②各组分无色，用薄层色谱法逐一鉴定，将相同组分的收集液合并在一起。

③蒸馏除去洗脱溶剂，即得各组分。

六、注意事项

①洗脱剂应连续平稳地加入，洗脱剂液面始终高亍吸附剂表

面，丌能中断。

②洗脱过程中，可采用梯度洗脱，也可以分步进行淋洗。

③洗脱过程中，样品在柱内的下移速度丌能太快，但也丌可

太慢。

④当色谱带出现拖尾时，可适当提高洗脱剂极性。

七、思考不讨论

①