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。
动物肝脏中DNA的提取及检测
一、前言
脱氧核糖核酸
脱氧核糖核酸(DNA,为英文Dexyribnucleicacid的缩写),
又称去氧核糖核酸,是脱氧核糖核酸染色体的主要化学成分,同时也
是组成基因的材料。有时也被称为“遗传微粒”,原因是在繁殖过程
中,父代会把它们自己DNA的一部分复制传递到子代中,从而完成性
状的传播。
DNA是高分子聚合物,DNA溶液为高分子溶液,具有很高的粘度,
可被甲基绿染成绿色。DNA对紫外线(260nm)有吸收作用,利用这
一特性,可以对DNA进行含量测定。当核酸变性时,吸光度升高,称
为增色效应;当变性核酸重新复性时,吸光度又会恢复到原来的水平。
较高温度、有机溶剂、酸碱试剂、尿素、酰胺等都可以引起DNA分子
变性,即DNA双链碱基间的氢键断裂,双螺旋结构解开—也称为DNA
的解螺旋。
在细胞内,DNA能与蛋白质结合形成染色体,整组染色体则统称
为染色体组。对于人类而言,正常的体细中含有46条染色体。染色
体在细胞分裂之前会先在分裂间期完成复制,细胞分裂间期又可划分
为:G1期-DNA合成前期、S期-DNA合成期、G2-DNA合成后期。对于
真核生物,如动物、植物及真菌而言,染色体主要存在于细胞核内;
而对于原核生物,如细菌而言,则主要存在于细胞质中的拟核内。染
。
1
。
色体上的染色质蛋白,如组织蛋白,能够将DNA进行组织并压缩,以
帮助DNA与其他蛋白质进行交互作用,进而调节基因的转录。
脱氧核糖核酸的结构
DNA的结构:DNA的结构一般可划分为一级结构、二级结构、三
级结构和四级结构四个水平。
DNA是一种长链聚合物,组成单位为四种脱氧核苷酸,即腺嘌呤
脱氧核苷酸(dAMP脱氧腺苷)、胸腺嘧啶脱氧核苷酸(dTMP脱氧胸
苷)、胞嘧啶脱氧核苷酸(dCMP脱氧胞苷)、鸟嘌呤脱氧核苷酸(dGMP
脱氧鸟苷)。而脱氧核糖(五碳糖)与磷酸分子借由酯键相连,组成
其长链骨架,排列在外,四种碱基排列在内。每个糖分子都与四
种碱基里的其中一种相连,这些碱基沿着DNA长链所排列而成的序
列,可组成遗传密码,指导蛋白质的合成。读取密码的过程称为转录,
是以DNA双链中的一条单链为模板转录出一段称为mRNA(信使RNA)
的核酸分子。
DNA是由许多脱氧核苷酸按一定碱基顺序彼此用3’,5’-磷酸
二酯键相连构成的长链。大多数DNA含有两条这样的长链,也有的
DNA为单链,如大肠杆菌噬菌体φX174、G4、M13等。DNA有环形DNA
和链状DNA之分。在某些类型的DNA中,5-甲基胞嘧啶可在一定限度
内取代胞嘧啶,其中小麦胚DNA的5-甲基胞嘧啶特别丰富。在某些
噬菌体中,5-羟甲基胞嘧啶取代了胞嘧啶。40年代后期,查加夫
(E.Chargaff)发现不同物种DNA的碱基组成不同,但其中的腺嘌呤
。
2
。
数等于其胸腺嘧啶数(A=T),鸟嘌呤数等于胞嘧啶数(G=C),因而
嘌呤数之和等于嘧啶数之和,一般用几个层次描绘DNA的结构。
浓盐法从动物组织中提取DNA
核酸和蛋白质在生物体中常以核蛋白(DNP/RNP)的形式存在,
其中DNP能溶于水及高浓度盐溶液,但在0.14M的盐溶液中溶解度
很低,而RNP则可溶于低盐溶液,因此可利用不同浓度的NaCl溶液
将其从样品中分别抽提出来。将抽提得到的DNP用SDS处理可将其分
离DNA和蛋白质,用氯仿-异戊醇将蛋白质沉淀除去可得DNA上清,
加入冷乙醇即可将其呈纤维状析出。
肝脏细胞
肝脏是由肝细胞组成,肝细胞极小,肉眼看不到,必须通过显微
镜才能看到。人肝约有25亿个肝细胞,5000个肝细胞组成一个肝小
叶,因此人肝的肝小叶总数约有50万个。肝细胞为
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