(2024年)ELISA知识简介PPT课件.pptx

ELISA知识简介PPT课件12024/3/26

CATALOGUE目录ELISA基本原理与类型样品处理与实验操作技巧ELISA在医学领域应用举例ELISA在科研领域应用举例ELISA实验常见问题与解决方案总结与展望：ELISA技术发展趋势预测22024/3/26

01ELISA基本原理与类型32024/3/26

酶联免疫吸附试验定义酶联免疫吸附试验（Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay，ELISA）是一种常用的固相酶免疫测定方法。它利用抗原抗体反应的特异性和酶的高效催化作用，通过化学方法将酶与抗体或抗原结合形成酶标抗体或酶标抗原。底物被酶催化后生成有色产物，产物的量与待测样本中的抗原或抗体量成正比，从而对待测样本进行定性或定量分析。42024/3/26

抗原与抗体之间的特异性结合反应，是免疫学检测的基础。抗原抗体反应酶能够催化底物发生化学反应，生成有色产物。在ELISA中，酶通常与抗体或抗原结合，形成酶标抗体或酶标抗原。当待测样本中存在相应的抗原或抗体时，它们会与酶标抗体或酶标抗原结合，形成复合物。复合物中的酶会催化底物生成有色产物，从而实现对样本的定性或定量分析。酶作用机制抗原抗体反应及酶作用机制52024/3/26

直接法将酶标抗体直接与待测样本中的抗原反应，适用于检测大分子抗原和具有多个抗原决定簇的抗原。间接法先将待测样本与特异性抗体反应，再加入酶标二抗与特异性抗体结合，适用于检测小分子抗原和半抗原。夹心法将特异性抗体包被于固相载体上，加入待测样本中的抗原与固相抗体结合，再加入酶标二抗与固相上的抗原结合，适用于检测大分子抗原和具有多个抗原决定簇的抗原。夹心法具有更高的灵敏度和特异性。直接法、间接法和夹心法比较62024/3/26

双抗体夹心法适用于检测大分子抗原，如病毒、细菌等微生物的感染检测以及大分子蛋白质的检测。间接法适用于检测小分子抗原或半抗原，如药物、激素等小分子物质的检测。竞争法适用于检测小分子抗原或半抗原，如药物、激素等小分子物质的检测。竞争法试剂盒中通常包含特异性抗体、酶标抗体和待测样本中的小分子抗原或半抗原。它们之间的竞争关系会影响有色产物的生成量，从而实现对样本的定性或定量分析。常见ELISA试剂盒类型及使用范围72024/3/26

02样品处理与实验操作技巧82024/3/26

一般使用无菌干燥管或促凝管采集血液，室温下自然放置30-60分钟，待血液凝固后，分离出血清。血清采集使用抗凝管采集血液，轻轻颠倒混匀，避免产生气泡，然后立即分离血浆。血浆采集根据实验需要，对血清或血浆进行适当稀释或浓缩，注意避免反复冻融。样品处理血清、血浆等样品采集和处理方法92024/3/26

试剂保存未开封的试剂一般保存在2-8℃冰箱中，避免冷冻。开封后的试剂应根据说明书要求保存，并在有效期内使用。试剂准备按照试剂盒说明书要求，将所需试剂从冰箱取出，平衡至室温后使用。注意检查试剂是否过期或变质。避免污染在试剂准备和使用过程中，注意避免交叉污染和微生物污染。试剂准备及保存注意事项102024/3/26

使用微量加样器准确加入样品和标准品，注意更换吸头，避免交叉污染。加样孵育洗涤将加样后的酶标板放入恒温箱中孵育，严格控制温度和时间，避免影响实验结果。使用自动洗板机或手动洗板，注意洗涤次数和洗涤液的量，确保洗涤干净。030201加样、孵育和洗涤步骤规范操作112024/3/26

根据标准曲线计算样品浓度，注意单位换算和有效数字的保留。对于阴性或阳性结果的判定，应根据试剂盒说明书或相关文献进行。结果判读了解实验误差的来源和影响因素，如操作误差、试剂误差、仪器误差等，并采取相应的措施进行控制和纠正。同时，进行重复实验和对照实验以提高结果的准确性和可靠性。误差分析结果判读标准及误差分析122024/3/26

03ELISA在医学领域应用举例132024/3/26

03其他传染病诊断ELISA技术还可应用于梅毒、淋病、结核病等传染病的诊断，通过检测特异性抗体或抗原实现病原体的快速识别。01病毒性肝炎检测采用ELISA技术检测肝炎病毒抗原和抗体，如HBsAg、HBeAg和抗-HCV等，实现病毒性肝炎的早期诊断和病程监测。02艾滋病病毒检测利用ELISA方法检测HIV抗体和p24抗原，用于艾滋病的筛查和确认。传染病诊断中ELISA技术应用142024/3/26

抗核抗体检测01采用ELISA方法检测抗核抗体（ANA），用于系统性红斑狼疮（SLE）等自身免疫性疾病的辅助诊断。类风湿因子检测02利用ELISA技术检测类风湿因子（RF），辅助诊断类风湿关节炎（RA）等疾病。其他自身抗体检测03ELISA还可应用于抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）、抗磷脂抗体（APL）等自身抗体的检测，为自身免疫性疾病的诊断提