He染色切片制作(各动物、全过程、操作要点、注意事项)(精品文档).pdf

石蜡切片制备基本步骤

一、准备工作

（一）洗涤实验所需器皿：（玻璃器皿的清洗）

1、用洗衣粉将玻璃器皿表里擦洗干净反复洗刷

2、将器皿在自来水下冲洗干净

3、将器皿倒扣在铺有吸水纸或纱布的桌子上控干

注：一般情况下，经以上步骤后，用蒸馏水洗过1~3次即可烘干备用，如果做特殊染色还需浸泡在酸性清洁液内12~24小时，再经

自来水彻底冲洗，再用蒸馏水过洗1~3次烘干备用。

（二）配制：硫酸洗液的配制

清洁液（洗液）的配制：

成分强酸液次强酸液弱酸液

浓硫酸（ml）1000200100

重铬酸钾（mg）63120100

蒸馏水（ml）2002001000

重铬酸钾1200g

蒸馏水2000ml

将2000ml浓硫酸缓缓倒入上述溶液中，边倒边用木棒轻轻搅拌

（三）载玻片与盖玻片的处理

1.将所需载玻片与盖玻片清洗后，放入硫酸重铬酸钾溶液中浸泡24小时

2.流水冲洗，再用蒸馏水冲洗3遍

3.95%~100%酒精浸泡24小时，用绸布擦干备用

注：在将载玻片与盖玻片放入清洁液中时，要一片片地投入，使其不致重叠。

二、常用液体的配制

（一）缓冲溶液：

1．磷酸盐缓冲液

A液：0.1mol/L磷酸二氢钠

B液：0.1mol/L磷酸氢二钠

A液与B液按比例混合整到所需的PH值（3：7≈PH7.0）

2．枸椽酸缓冲溶液

A液：0.1mol/L枸椽酸

B液：0.1mol/L枸椽酸钠

A液与B液按比例混合整到所需的PH值（6.2：42.8≈PH6.2）

（二）固定剂：

1．甲醛：10%甲醛

福尔马林100ml

蒸馏水900ml

注：实际甲醛含量只有3.6~4.0%但习惯上都将其视为10%。

2．10％中性福尔马林钙固定液

甲醛液10ml

蒸馏水90ml

加碳酸钙至过饱和(以容器底部碳酸钙沉淀1~2cm厚为适度)充分振荡混合后，放置24小时取上清液使用。

3．4%多聚甲醛：

8%多聚甲醛

多聚甲醛8g

蒸馏水100ml

加温至60℃左右，不时搅拌，成为乳白色溶液。滴加1NNaOH，并不停搅动至液体清明。

1NNaOH

lN等于1L溶液中某种物质1mol除以该物质的氢当量价所得数值的量

氧化钠(NaOH)；分子量＝40．005，当量价＝1

1NNa0H的配制方法为：m＝40．005／1＝40．005g。取40．005gNaOH溶解于1L蒸馏水中

4%多聚甲醛

8%多聚甲醛50ml

0.1M磷酸盐缓冲液50ml

PH7.2

先取50ml8%多聚甲醛，用0.1M磷酸二氢钠和0.1M磷酸氢二钠将PH值至7.2

4．Bouin液：

苦味酸饱和水溶液75ml

36％~40％福尔马林液25ml

冰醋酸5m1

5．改良Bouin氏固定液

苦味酸饱和水溶液45ml

95%酒精45ml

36％~40％福尔马林液5ml

冰醋酸5m1

6．Carnoy液：

冰醋酸10m1

氯仿30m1

无水乙醇60m1

以上三者临用前混合，预冷至4℃后使用。24小时后固定液失效。

（三）染色液

1．Harris苏木精液

A液：

苏木精1g

无水酒精10ml

B液：

铵矾或钾矾20g

蒸馏水200ml

氧化汞0.5ml

冰醋酸8ml

将矾溶于水，加热溶解（B液），稍冷后将苏木精酒精液（A液）混入B液，加热，稍冷却，加氧化汞，再继续加热1分钟，染液变为

紫色，注意在加氧化汞时宜逐渐少量加入，防止染液溅出。全冷后呈深紫色，将烧杯口用纱布盖好，隔夜过滤，在过滤液内每96

ml中加4ml冰醋酸，放置1周后成熟，即可用于染色，保存期1~2个月。此染液在加醋酸后，对核染色特具选择性，故很适于脱

落细胞的核染色。由于染液内已加有氧化剂，故不能长期储存，但利于配后即用。

2．Mayer苏木精掖

苏木精1g

钾矾或铵矾50g

碘酸钠0.2g

蒸馏水1000ml

水合氯醛50g

枸橼酸1g

将苏木精，钾矾及碘酸钠依次加入水内，略加热并搅拌，此时液体呈蓝色，待全溶后过夜。再加入水合氯醛及枸橼酸并加热至煮

沸5分钟，冷后过