ABO血型鉴定策略.ppt

ABO血型鉴定策略陕西省血液中心徐华ABO血型的发现ABO血型鉴定的实验方法ABO血型鉴定主要是利用抗原与抗体之间特异性结合的凝集反应来完成的，包括正定型（forwardtyping）与反定型（reversetyping）；纸片（凹板）法、试管法、凝胶柱法、流式细胞术…ABO血型的鉴定结果必须正、反定型一致，当正、反定型结果不一致时，可视作ABO疑难血型。ABO疑难血型的鉴定策略分析其导致异常结果的各种原因，在策略上，采用排除法，即排除一切不可能，剩下的就是可能的。首先应排除人员、实验的原因：标本；试剂；漏检；笔误。首先重复试验，必要的情况下重新采集新鲜标本；待检血清纤维蛋白要完全析出，耐心等待；洗涤红细胞；复审和核对。正定型实验的难点正定型实验主要难点：红细胞表面A/B抗原的改变（减弱）；健康个体中的ABO亚型：红细胞表面携带抗原数量较少；疾病导致ABO抗原减弱：对于临床标本，了解患者的临床诊断和疾病进程是很有必要的。抗体的选择单克隆抗体的特性是对制备免疫克隆的抗原表位具有很好的识别功能，另一方面可以被视为一种“单纯”的抗体，对于缺乏相关表位的一些变异型则缺乏检出能力。案例1：产品1-正定A?B，反定B型（2+～3+）产品2-正定B，反定B型（A细胞2+）吸收放散结果-A弱B，有抗-A1抗体案例2：产品1-正定AB?，反定A型(+)产品2-正定B，反定B型吸收放散结果-AB弱，有抗-B抗体人源抗体的使用人源抗体是混合型的抗体，其覆盖的抗原结构很多；结合一些敏感的血清学技术可以用于鉴定出弱表达的A/B抗原；O型人的抗-A+B抗体，可以检出很多弱表达的A/B抗原，通过采用抗-A+B，可以鉴定或排除样本为“O”型或“非O”型；人源抗体的使用前需要做好质量控制。怎么做？在进行正定型试验时，若试验结果在显微镜下凝集不明显，应将检测试管置于室温、37℃或4℃中放置30min，再用显微镜检查核实；进一步确认：吸收放散试验、糖基转移酶试验、流式细胞术及基因检测等方法。吸收放散试验“吸收”就是用红细胞（抗原）在最适条件下充分吸收抗体，相应抗体“收集器”的作用；“放散”则是将吸附于红细胞上的抗体用物理或化学的方法使其脱离下来，然后再采用指示红细胞来检测抗体。吸收放散试验的“相对浓缩”作用：虽然每个弱抗原红细胞能够结合的抗体数目很少，但大量红细胞的叠加作用使得结合抗体的“绝对值”大大增加，所以放散液中抗体的浓度相对较高；加入少量常见表型红细胞（试剂红细胞）后，就会表现出显著的凝集反应现象；间接而敏感的方法。吸收放散法可用来检测抗原，也可用来检测抗体，判断过程是一个反向推断的演绎过程；吸收放散试验还可用于排除实验的干扰因素：多凝集、全凝集……注意操作细节，阴性对照设置等。亚型和弱凝集血清学实验结果源于主观上的判断，是一种主观性实验（Subjectivetest），对凝集结果的有和无（阳性和阴性）相对容易判定，但对于凝集的强度（2+？1+？±？）则很难界定，不同的实验人员会有不同的感观判断和结论，而这往往影响到A、B亚型的鉴定结果（归类）。对临床医生来讲，过细的亚型区分往往会引起更多的混乱；从临床实际应用的角度出发，对ABO弱表现型的血清学检测结果以描述性的报告更为合适，如“A弱”，“B弱”，“A弱B”等。易于临床医生掌握与理解，也更易于输血科工作人员与临床医生的沟通。反定型实验的策略讨论一定要做反定型！在进行反定型检测时，必须设置O型红细胞对照组，O型红细胞所起的作用是提示血清中是否存在抗-H、不规则抗体、冷凝集素、高球蛋白血症等干扰红细胞凝集的物质；反定型结果不正确，无外乎两种情况：出现了“多出来的凝集”以及“少了应有的凝集”。反定型出现的问题多出来的凝集：冷抗体；高免疫球蛋白血症；IgM型不规则抗体。冷自身抗体（冷凝集素）：低于25℃就能被激活，在健康个体中广泛存在；排除干扰：阴性对照；37℃，5min，保温观察。其它……高免疫球蛋白血症的凝集加入生理盐水后，凝集消失。IgM型不规则抗体ABO亚型产生的不规则抗体：与A、B试剂红细胞凝集程度弱，且不与O型试剂红细胞发生凝集反应；反定型呈弱凝集，正反定型结果相符：需特别注意是否存在由ABO亚型不规则抗体引起的凝集而导致的血型误判；AB亚型？ABO亚型不规则抗体导致的反定型异常往往伴随着正定型红细胞的抗原减弱或缺失，即使正反定型相符，如果有弱凝集现象，则都应