(44)--知识点24-蛋白质分子质量的测定方法.ppt

生物化学

Biochemistry

第一章、蛋白质第一节、蛋白质概述第二节、氨基酸的结构与性质第三节、蛋白质的分子结构第四节、蛋白质结构与功能的关系第五节、蛋白质的分离、纯化和表征

一、蛋白质分子质量的测定方法1、根据化学组成测定最低相对分子质量此法首先利用化学分析方法测定蛋白质分子中某一特殊成分的百分含量；然后，假定蛋白质分子中该成分只有一个分子或原子，据其百分含量可计算出最低相对分子质量：最低相对分子质量＝（已知成分的相对分子、原子质量）/已知成分的百分含量如果蛋白质分子中所含已知成分不是一个单位，则真实相对分子质量等于最小相对分子质量的倍数。

一、蛋白质分子质量的测定方法2、沉降速度法（超离心法）在60000～80000r/min的超速离心力作用下，蛋白质分子会沿旋转中心向外周方向移动。用光学方法（依折射率变化）测定界面移动的速度即为蛋白质的离心沉降速度。蛋白质的沉降速度与分子大小和形状有关。

一、蛋白质分子质量的测定方法2、沉降速度法（超离心法）沉降系数是溶质颗粒在单位离心场中的沉降速度。根据斯维得贝格〔Svedberg〕方程，由沉降系数计算出蛋白质分子的相对分子质量。

一、蛋白质分子质量的测定方法3、凝胶过滤法凝胶过滤所用介质为凝胶珠，其内部为多孔网状结构。如交联葡聚糖（Sephadex）。一定型号的凝胶网孔大小一定，只允许相应大小的分子进入凝胶颗粒内部，大分子则被排阻在外。洗脱时大分子随洗脱液从颗粒间隙流下来，洗脱液体积小；小分子在颗粒网状结构中穿来穿去，历程长，后洗脱下来，洗脱体积大。只能测定球形蛋白质，不能测定线形的或与凝胶能发生吸附作用的蛋白质。

一、蛋白质分子质量的测定方法3、凝胶过滤法测得几种标准分子量蛋白质的洗脱体积〔Ve〕；以相对分子质量对数（logMr）对Ve作图，得出标准直线；再测出未知样品洗脱体积〔Ve〕从标准曲线上可查出样品蛋白质的相对分子质量。

一、蛋白质分子质量的测定方法4、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法SDS：十二烷基硫酸钠，变性剂普通蛋白质电泳的泳动速率取决于荷质比（净电荷、形状、大小）；用SDS和巯基乙醇（打开二硫键）处理；蛋白质变性（肽链伸展）并与SDS结合，形成SDS-蛋白质复合物；不同蛋白质分子均带负电（SDS带负电）；且荷质比相同（每2分子氨基酸残基结合1分子SDS）。

不同蛋白质分子具有相似的构象（雪茄烟状）。

一、蛋白质分子质量的测定方法4、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法用几种标准蛋白质相对分子质量的对数值对它们的相对迁移率（样品迁移距离/前沿染料迁移距离，μR）作图（lgMr=a-bμR）；测出待测样品的迁移率；从标准曲线上查出样品的相对分子质量。

一、蛋白质分子质量的测定方法4、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法

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