(完整版)细胞数的测定(血球计数板的使用方法).doc

细胞数的测定 一、目的与要求 了解血球计数板计数的原理，学会测定细胞总数方法。 二、原理 用血球计数板在显微镜下 直接计数 是一种常用的微生物计数方法。血球计数板是一块特制的厚载玻 片，其上由四条槽构成三个平台，中间较宽的平台又被一短横槽隔成两半，每一边的平台上各刻有一个方 格网，每个方格网共分为 9 个大方格，中间的大方格即为 计数室 。计数室的刻度一般有两种规格，一种是 一个大方格分成 16 个中方格，每个中方格又分成 25 个小格（即 16x25 ），另一种是一个大方格分成 25 个 中方格，每个中方格又分为 16 个小方格（即 25× 16），但无论是哪一种规格的计数板，每一个大方格中的 小方格都是 400 个，每一个大方格边长为 1 mm，则每一个大方格的面积为 1 mm2，盖上盖玻片后，盖玻片 与载玻片之间的高度为 0.1mm，所以计数室的容积为 0.1 mm3 三、血球计数板的使用方法 （一） 菌悬液的制备 宜，可采用 10 倍系列稀释法。  为便于计数，对样品进行适当稀释，稀释程度以每小格内含  5～ 10  个酵母为 （二） 加菌悬液样品 将清洁干燥的血球计数板盖上盖玻片，再用无菌的毛细滴管将摇匀的菌悬液 由盖玻片边缘滴一小滴，让菌液沿缝隙靠毛细渗透作用自动进入计数室，用吸水纸吸去多余水液。由盖玻 片边缘或槽内加入计数板来回推压盖玻片，使其紧贴在计数板上，计数室内不能有气泡。静置 5-10 分钟。 （三）显微镜计数 在低倍镜下找到小方格网后更换高倍镜观察计数，上下调动细螺旋，以便看到小室内不同深度的菌体。位于分格线上的菌体，只数两条边上的，其余两边不计数。如数上线就不数下线，数左边线就不数右边线。当芽孢菌体达到母细胞大小的二分之一时，可记作两个细胞。 （四）计数时若使用刻度为 25× 16（大格）的计数板，则数四角的 4 个大格（即 100 小格）内的菌 数。如用刻度为 16×25（大格）的计数板，除数四角的 4 个大格外，还需数中央 1 个大格的菌数（即 80 小格）。每小格中菌数以 5-10 个为宜，如菌液过浓可适当稀释。 （五）每个样品重复计数 2-3 次，取其平均值，按下式计算样品中的菌数。 （六）计数完毕， 将计数板在水龙头下冲洗干净， 切勿用硬物洗刷， 洗完后自行晾干或用电吹风吹干。 计数时，如果使用 16×25 的计数板，要按对角线方位取 左上、左下、右上、右下 上述 4 个中格进行 计数（即计数 100 个小格中的细胞数） , 如果使用 25×16 规格的计数板，则除了计数上述 4 个中格外，还 要计数中央的 1 个中格，即计数 80 个小格中的细胞数，分别按下述公式计算出细胞数。 （ 1）16×25 格的血球计数板计算公式： 1mL 细胞数＝ --------------------- ×400× 104 ×稀释倍数 （ 2）25×16 格的血球计数板计算公式： 1mL 细胞数 =----------------------- × 400× 104 ×稀释倍数 四，材料与仪器 菌悬液，显微镜，血球计数板，载玻片，盖玻片，接种环，吕氏美蓝 五、实验报告 次数 1 2 中格序号 左上 左下 右上 右下 中 左上 左下 右上 右下 中 细胞数 细胞总数