麦芽根应用在核酸水解工艺的研究.pdfVIP

2009．1(总第152期) 蓄一 幽蒌堡曼．蕉鲮 麦芽根应用在核酸水解工艺的研究 冯芳’刘建军 赵祥颖 (1．山东农业大学 食品科学与工程学院 泰安 271018) (2．山东省食品发酵工业研究设计院 济南 250013) 摘 要 从麦茅根 中提取到磷酸二酯酶粗酶液经一定预处理工艺后，可用于来源于啤酒废酵母的RNA水解，以5’一核苷酸 含量及酶解转化率为指标，初步确定核糖核酸在麦芽根粗酶液作用下水解的最适条件：底物浓度、酶用量、反应时间、 反应温度及反应pH等。 关键词 麦芽根 预处理 RNA酶解 引言 外吸收法。 核酸作为药 品和保健 品近年来 引起人们 1．5 试验方法 ：取一定实验室从啤酒废酵母中 的广泛重视，被称为 “人类最后的营养素”， 提取 自制 的RNA，配制为一定浓 度 的核酸溶液 机体 内核酸需被各种酶切割成核苷酸等小分子 备用 。将一定质量麦芽根加去离子水 ，浸提后 吸收 ，随着分子生物学和制药工业 的发展，核 4000r／min，20min离心后得粗酶液 ，经预处理 酸 、核苷酸及其衍生物成为研 究热点 ，在食 后，按照一定的比例加入核酸溶液，分别在不同 品、医药等方面有广泛应用。利用酶法制取核苷 条件下进行酶解，酶解完后测定溶液中核苷酸含 酸，从麦芽根 中提取的磷酸二酯酶可以用来降解 量及5’一核苷酸含量，从而计算核酸的酶解转化 核酸生成四种核苷酸的混合物，尤其是对酶解工 率。 艺的研究， 目前国内外报道较少 。本文采用从啤 酒废酵母中提取的RNA作为酶反应的原料 ，用 2 结果与讨论 麦芽根中提取到的磷酸二酯酶酶降解，生成四种 2．1酶液预处理 核苷酸的混合物 。通过对酶解条件的研究，摸索 从麦芽根中提取的粗酶液成分较复杂，其中 从麦芽根中提取到的核酸酶对RNA的最适酶解 除含有磷酸二酯酶，还有磷酸单酯酶等其他杂酶 的工艺条件 。 活性，因此利用其热稳定性不同，采用加热预处 理方法对酶进行初步纯化，钝化杂酶 。 1 材料与方法 2．1．1预热温度对酶解反应的影响 1．1材料：麦芽根：泰山啤酒厂废料 ；核糖核酸， 酶液在 不 同温度 下加 热 10min，冰 浴冷 实验室 自制，纯度90％以上。 却，测定残留酶活，对照组不做预热处理 ，在 1．2试剂：钼酸铵、浓硫酸、抗坏血酸、过碘酸、 相 同条件下进行酶解反应并测定核苷酸含量计 乙二醇、硫酸锌、氨水、甲胺等为分析纯。 算反应转化率 ，不同预热温度对酶活及酶反应 1-3主要仪器设备：恒温水浴锅，紫外可见分光光 转化率影 响结果见表 1。由结果可知，在60℃ 度计，722可见分光光度计，漩涡混合器，高速离 时 ，酶活损失小，残留酶活较高，并且转化率 心机。 较对照组有 明显提高，因此选用6O℃作为酶的 1．4分析方法：核苷酸测定采用过碘酸氧化法、紫 预热处理温度 。 ShandongFoodFermentation ——3—’ 山东食品发酵 2009．1(总第152期) 表1预热温度对酶活损失及酶解反应转化率的影响 10O 100 酶活残留比例