chap药物的含量测定方法与验证.ppt

Quantitative analysis of drug and validation of analytical method Section 1 Methods of quantitative analysis 第一节 定量分析方法的分类与特点 高效液相色谱法 一 高效液相色谱法发展概况 高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）：采用高压输液泵将具有不同极性的流动相泵入装有固定相的色谱柱进行分离测定的色谱方法。 色谱柱的发展 检测器的发展 二．HPLC分析系统的硬件组成 1．基本组成： 输液系统 → 进样系统 → 色谱柱 → 检测器 → 数据处理系统 5. 液相色谱柱的使用和保养 （1）新色谱柱 拿到一根新色谱柱时，先测柱效与柱压 保留在新色谱柱上测得的色谱图，并记录条件 定期检测柱效 （2）色谱柱的保养 ① 样品方面 除去微粒及杂质 溶解性效应:了解样品在流动相中的溶解度，如样品的溶剂不是流动相，一定要用流动相试溶解度，防止其在流动相中析出。 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用 ② 流动相方面 除去微粒 纯度的要求 超纯水 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 缓冲液的pH值、浓度 流动相对样品的溶解度 ③ 在线的保护装置 给色谱柱提供物理的保护 除去样品及流动相中的颗粒 给色谱柱提供化学的保护 防止分析柱被化学污染 装置 在线过滤器 保护柱 （3）色谱柱的清洗 盐的清洗 对所做的样品要有充分的了解 用对该样品洗脱能力最强的流动相清洗 硅胶柱的一般清洗方法 先用甲醇洗去极性杂质 用干燥的二氯甲烷、正庚烷100-200ml依次活化 键合相柱(烷基)的一般清洗方法 20倍柱体积的：水-甲醇-氯仿-甲醇-水依次冲洗 水—甲醇—异丙醇—二氯甲烷—异丙醇—甲醇—水 （4）色谱柱的存放 存放前的处理 除去杂质、盐  合适的存放溶剂 避免色谱柱床的干枯 防止细菌生长 避免机械震动 注意存放的温度 2.液相常用检测器 三. 化学键合相色谱法 （Chemical bonded phase chromatography， BPC） 化学键合相：固定液与载体间通过化学反应键合成固定相。 1.分类 （按键合的有机分子官能团的不同） 非极性键合相 极性键合相 离子性键合相 2.特点：柱子不“娇”；耐溶剂冲洗；热稳定性好。 3.非极性键合相色谱（又称反相键合相色谱） （1）常用固定相 十八烷基硅烷键合硅胶（ODS，C18） 辛烷基硅烷键合硅胶（C8） pH稳定范围：2-8 （2）流动相 标准溶剂系统：水～甲醇 4.极性键合相 5.离子对色谱 离子抑制技术——有机弱酸，弱碱物质 离子对技术——强酸（碱）性物质 （1）分离原理 流动相中加入反离子，使与组分离子形成疏水离子对，在固定相上有适宜的保留。 A+ + B- （A+B-） A+ 组分离子，B- 反离子 ，A+B- 离子对 （2）反相离子对色谱条件选择 固定相： C18 、C8柱 流动相：含一定反离子、一定pH值的水-甲醇 反离子的选择 酸性药物（A-）：选用季胺盐作为离子 对试剂（pH7.0左右） 碱性药物（A+）：选用烷基磺酸/硫酸 盐作为离子对试剂（pH3.5左右） 五、HPLC定量方法 ②测定含氟有机药物时，用石英制燃烧瓶。 ③铂丝起催化作用。 ④应同时做空白试验。 ⑤注意防爆。 ⑥燃烧要完全。 ⑦烟雾完全被吸收。 Section 3 Validation of analytical method Section 3 Validation of analytical method 需验证的分析项目 1. 鉴别试验； 2. 杂质定量或限度检查； 3. 原料或制剂中有效成分含量测定； 4. 制剂中其它成分（降解产物、防腐剂等）的测定； 5. 溶出度、释放度等功能检查中的溶出量等的测试方法。 （一）鉴别反应 应能与其它共存的物质或相似化合物区分，不含 被测组分的样品均应呈现负反应。 （二）含量测定和杂质测定 色谱法和其他分离法，应附代表性的图谱，以说 明专属性。图中应注明各组分的位置，色谱法中分离 度应符合要求。在能获得杂质的情况下，可加到试样 中，考察对结果的干扰。在杂质和降解物不能获得的 情况下，可用以验证方法和药典方法进行对照；也可 用对试样加速破坏