临床检验基础--血液标本采集和制片.ppt

二、血涂片染色 【试剂】 瑞氏染液、pH6.4～6.8磷酸盐缓冲液 【染色方法】略 【瑞氏染色结果判断】  正常染色 偏酸 偏碱 【瑞氏染色注意事项】 (１)未干透血膜，染色时易脱落，故血膜应干透再染色。 (２)染色时间与染液浓度，室温高低，细胞多少有关。 (３)冲洗前，先在低倍镜下观察有核细胞是否着色。否则适当延长时间。 (４)染液不能过少，以防蒸发，染料沉着在血膜上不易冲掉，影响观察。 染料－缓冲液。 【瑞氏染色注意事项】 (５)冲洗时，应以流水冲去，防染料沉着。 (６)染色应注意保存血片尾部，不能用蜡笔划去，因体积大的细胞常在此出现。 (７)若要复染,应先加缓冲液后再加染液，或加已混合好的。 (８)染色过深可用水冲洗或浸泡一定时间，或用甲醇 退色。 （二）姬姆萨染色法 原理与Wright染色法大致相同, 　 姬姆萨染料由天青和伊红组成 【评价】: (1)本法对细胞核和疟原虫染色较好 (2)对细胞质和颗粒较差 (三)瑞-姬氏染色 瑞-姬氏染色液 = 瑞氏粉1g＋甲醇500ml+姬氏粉0.3g 【评价】兼有上述两法的优点,染色效果更好、快速。 * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * （一）枸橼酸钠 用途： 1.止凝血象检查，血液保养液用109mmol/L按1:9比例。 2.血沉测定，用106mmol/L与血按1:4比例。（ICSH国际血液学标准化委员会推荐） 缺点：不适于血细胞计数。 三、血液标本的抗凝 （二）草酸钠： 机理：可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，阻止血凝固。 浓度：0.1mol/L，与血按1:9比例混合。 用途：出凝血性疾病 缺点：不能作血涂片，因可产生草酸盐结晶，还可使淋巴细胞核出现“三叶式”改变或红细胞出现棘形。 三、血液标本的抗凝 （三）双草酸盐：草酸钾+草酸铵 机理：与钙离子形成草酸钙沉淀达到抗凝。 配制：100ml抗凝剂中含草酸钾0.8g，草酸铵1.2g取此液0.2～0.5ml于小瓶内80℃以下/烘干可使2～5ml血不凝。>80℃草酸酸盐可被分解为碳酸盐而失效。 三、血液标本的抗凝 （三）双草酸盐：草酸钾+草酸铵 用途：草酸钾盐或钠盐可使红细胞体积皱缩（约11%）。草酸铵可使红细胞胀大。二者适当混合不影响红细胞形态和体积如：红细胞比积，血细胞计数，网织红计数等，抗凝以后５小时结果可靠。 缺点：草酸盐可引起血小板聚集，并可影响白细胞形态故不适用于血小板计数和白细胞分类计数。 三、血液标本的抗凝 （四）肝素： 肝素广泛存在于肺、肝、脾等几乎所有组织的血管肥大细胞和嗜碱性粒细胞的颗粒中。 三、血液标本的抗凝 （四）肝素： 机理： 1.与抗凝血酶Ⅱ(AT-Ⅱ)一起，在低浓度能抑制因子IXa、Ⅷ和PF3之间的作用，阻止凝血酶形成。 2. 加强抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)灭活丝氨酸蛋白酶，从而阻止凝血酶形成 3. 抑制凝血酶的自我催化抑制因子Ⅹ的作用。 4. 高浓度时可阴断凝血酶与纤维蛋白的反应 三、血液标本的抗凝 （四）肝素： 配制：肝素粉（每mg含100～125单位），配成1g/L水溶液取0.5ml置小瓶中，放37℃～50℃烘干，可抗凝血5ml。 三、血液标本的抗凝 三、血液标本的抗凝 （四）肝素： 用途：肝素具有抗凝能力强，不影响血细胞引起溶血等优点，为一种较好的抗凝剂。红细胞计数，血红蛋白测定，红细胞比积及多种生化分析。也是抗血栓药物之一。 缺点：过量肝素会引起白细胞凝集和血小板减少，故不能用于白细胞计数，血小板计数。肝素抗凝血瑞氏染色后背景呈是深兰色，影响镜检，故也不适于作DC。 三、血液标本的抗凝 （五）乙二胺四乙酸（EDTA）盐： 机理:与血中钙离子结合成螯合物,阻止血液凝固. 配制：ICSH建议其使用浓度为每毫升血1.5～2.2mg。实验室常将其配成15g/L，取0.5ml100℃，烘干，可抗凝血5ml。 三、血液标本的抗凝 用途：适用于多项血液学检查 血细胞计数（特别是血小板计数） 红细胞比积测定（室温下48h内红细胞比积不改变） （五）乙二胺四乙酸（EDTA）盐： 三、血液标本的抗凝 （五）乙二胺四乙酸（EDTA）盐： 缺点： 1.影响血小板聚集和白细胞吞噬功能，不适于出血凝血检查及血小板功能检