检测生物组织中的还原糖脂肪和蛋白质资料.ppt

L/O/G/O 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 2011-10-8 实验 实验 还原性糖的鉴定 脂质的鉴定 蛋白质的鉴定 Click to add title in here 4 1 2 3 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 4 淀粉的鉴定 （一）还原糖的鉴定 1、实验原理 NaOH + CuSO4 → Cu(OH)2 蓝色沉淀 + … … Cu(OH) 2 + 还原糖→Cu 2 O 砖红色沉淀 + … … （水浴条件：50℃---65℃） 葡萄糖等还原糖分子中存在醛基等还原性基团能与斐林试剂作用生成砖红色沉淀。 斐林试剂 ：甲液：质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液 乙液：质量浓度为0.05g/ml的CuSO4溶液 材料 Text in here Text in here Text in here ①材料要含有丰富还原糖 ②材料颜色为白色或近于白色以免造成干扰 选材 原则 富含还原糖 富含蔗糖 含淀粉但还原糖很少 颜色干扰 富含蔗糖 富含还原糖 2、实验步骤 反应初始 反应结束砖红色 对照 蓝色 棕色 砖红色 3、注意事项 要选择含还原糖丰富，颜色为白色或近于白色的植物组织 斐林试剂不稳定，一般配成甲液、乙液来分别配制、储存。使用时将甲液、乙液等量混合均匀，现配现用 1、材料选取 2、斐林试剂 对试管中的溶液进行加热时，试管底部不要触及烧杯底部；试管口不要朝向实验者 3、水浴加热 实验 还原性糖的鉴定 脂肪的鉴定 蛋白质的鉴定 Click to add title in here 4 1 2 3 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 4 淀粉的鉴定 （二）淀粉鉴定 1、实验原理 2、选材 选择淀粉含量高，颜色近于白色的生物组织，如马铃薯块茎研磨液 淀粉遇碘会变成蓝色 3、过程及结果 向2ml组织样液中加两滴碘液，摇匀后变成蓝色 （三）脂肪的鉴定 1、实验原理 脂肪可被 苏丹Ⅲ染成橘黄色 苏丹Ⅳ染成红色 苏丹Ⅲ 材料 选择富含脂肪且比较大的种子，成熟花生种子是最好的选择，实验前浸泡3～4小时 时间过长：组织太软，切下的薄片，不易成形 时间过短：不容易切片 2、实验步骤 注意事项 切片要尽可能薄，观察时要找最薄处，最好只有 1～2层细胞 染色后一定要用体积分数为50﹪的酒精溶液洗去浮色 用苏丹Ⅲ染色时间不宜过长，否则脂肪会溶解在苏丹Ⅲ溶液中的酒精里 3、注意事项 实验 还原性糖的鉴定 脂肪的鉴定 蛋白质的鉴定 Click to add title in here 4 1 2 3 检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质 4 淀粉的鉴定 （四）蛋白质的鉴定 1、实验原理 蛋白质与双缩脲具有相同的结构------肽键，能在碱性环境下与双缩脲试剂中的Cu2+产生紫色络合物 双缩脲试剂A液：质量浓度为0.1g/ml的NaOH溶液 B液：质量浓度为0.01g/ml的CuSO4溶液 注：双缩脲与双缩脲试剂不同。 材料： 浸泡1～2天的大豆种子（或豆浆）或鸡蛋蛋白，也可用鲜肝提取液 2、实验步骤 3、注意事项 实验样液要留出一份作为对照（还原糖、淀粉的鉴定也要留出样液进行对照） 使用双缩脲试剂时，应先加A液造成碱性环境，再加B液 若使用蛋清，必须按要求稀释，如果稀释不够会粘附于试管壁上，不易洗刷 拓展：斐林试剂与双缩脲试剂的对比 斐林试剂 双缩脲试剂 鉴定成分 还原糖 蛋白质 鉴定原理 还原糖中的醛基在加热条件下能将Cu(OH)2中的Cu2+还原成Cu+，从而生成砖红色Cu2O沉淀 双缩脲在碱性溶液中能与Cu2+结合生成紫色络合物，蛋白质分子中含有与双缩脲结构相似的肽键，因而也能与Cu2+作用 试剂浓度 甲液：质量浓度为0.1g/mol的NaOH溶液， 乙液：质量浓度为0.05g/mol的CuSO4 溶液 A液：质量浓度为0.1g/ml的 NaOH溶液 B液：质量浓度为0.01g/ml的CuSO4溶液 使用方法 甲液、乙液等量混合均匀后再加入样液 先加A液造成碱性环境后，再加B液 使用条件 水浴加热（50℃---65℃） 不加热 实验现象 浅蓝色 棕色 砖红色 紫色 唯一用到显微镜的实验——脂质的鉴定 唯一需要加热的实验——还原糖的鉴定 非还原糖中加入斐林试剂现象：不是无色而是蓝色 典型例题分析： 1、在“检测生物组织中的糖类、脂肪和蛋白质”的实验中提供了如下备选实验材料： 苹果、白萝卜、大米、韭菜的叶、核桃、油