NOS在缺氧胎鼠组织中表达及当归保护机制实验的研究.pdf

NOS 在缺氧胎鼠组织中的表达及 当归保护机制的实验研究 摘 要 目 的：探讨一氧化氮合酶(Nitric Oxide Synthase, NOS) 在宫内缺氧状态下胎鼠骨髓、软骨、神经组织中的表达，以 及中药当归注射液(Angelica injection) 对宫内缺氧组织的保护 作用，为临床宫内缺氧的治疗和愈后评价提供理论依据和实 验数据，并为生育控制和妊娠疾病的研究、诊断及治疗提供 新的思路和手段。方 法：(1) 动物分组及饲养：将 6 只雌性Wistar 大鼠分别与雄鼠合笼饲养，于次晨发现阴栓者记为怀孕 0 天， 记下日期，单独饲养雌鼠至 19 天孕期。将 6 只孕鼠随机分为 对照组、缺氧组和当归组，每组 2 只。(2) 缺氧动物模型建立： 将对照组孕鼠经尾静脉缓慢注射 0.9% 生理盐水(8ml/kg 体重)1 小时后脱颈处死，快速剖腹取出胎鼠( 每只孕鼠产胎鼠 5~8 只) ，剔除子宫壁、羊膜等后, 中性福尔马林固定；将缺氧组孕 鼠经尾静脉缓慢注射 0.9% 生理盐水(8ml/kg 体重) ，建立缺氧 模型致胎鼠宫内缺氧 1 小时后复氧 1 小时，再用与对照组相 同的方法取材固定；当归组孕鼠用 25% 的当归注射液(8ml/kg 体重) 代替生理盐水，其余与缺氧组相同。(3) 石蜡切片和免疫 组化实验：每小组选 10 个胎鼠整胎作石蜡横切片，每个标本 选取相邻 4 张切片间隔作 HE 染色及神经型一氧化氮合酶 (nNOS) 免疫组化反应。(4) 图像分析和统计分析：选取三组中 均含有骨髓、神经组织、软骨组织切片各 3 张，每张切片用 GD —8 病理彩色图像分析系统，在 400 倍下进行图像分析，每张 3 切片 5 个视野，由计算机处理系统测定各组免疫反应阳性细 胞的光密度，数据用 SAS 软件统计分析，结果以 X ±S 表示。 结 果：1 、免疫组化染色：(1) 对照组：少数骨髓中有核红细 胞、神经组织中神经细胞胞质染浅棕色，软骨组织中软骨囊 染浅棕色；(2) 缺氧组：骨髓中有核红细胞、软骨组织中软骨 细胞胞质、软骨囊均染成棕色，神经组织中神经细胞胞质染 成深棕色；(3) 当归组：三种细胞胞质均染成棕色。2 、免疫组 化染色图像分析：三种组织中缺氧组 nNOS 含量均较对照组、 治疗组明显增加(P0.05) ，治疗组 nNOS 含量比缺氧组明显减 少(P0.05) 。结 论：(1) 通过孕鼠缺氧成功建立宫内胎鼠缺氧 模型；(2) 对照组骨髓、神经组织 中少量有核红细胞、神经细 胞胞质、软骨囊有 nNOS 活性，提示 nNOS 激活产生适量 NO 对胚胎发育起着生理调节作用；(3) 孕鼠缺氧 1 小时引起宫内 胎鼠骨髓、软骨、神经组织中 nNOS 活性增强，提示 nNOS 广 泛存在于机体各组织，其过量表达可能是宫内缺氧时引起胚 胎多种组织细胞，特别是神经组织损伤的重要机制之一。(4) 应用中药当归注射液后，骨髓、神经组织、软骨组织中阳性 细胞的 nNOS 的活性显著减弱，提示当归注射液对宫内缺氧胎 鼠有保护作用。 关键词：缺氧；一氧化氮合酶；当归注射液；保护；胎 鼠 4 The express