Shh%2fBMP4信号在先天性肛门直肠畸形中表达的研究.pdf

·中文论著摘要· Shh／BMP4信号在先天性肛门直肠畸形中表达的研究 刖 置 先天性肛门直肠畸形是胚胎期后肠末端发育异常的一类疾病的总称，病变涉 及肛门、直肠、尿道及外生殖器，是4,JL最常见的消化道畸形，虽经治疗却常有 不同程度的后遗症，严重危及患儿生命和生活质量，因此，对其发病机制的研究 具有重要的意义。 发生肛门直肠畸形是一个复杂的病理过程，涉及许多基因的异常调控，但迄 今为止致病基因尚未明确，研究仍处于探索阶段。近年来研究发现，Shh／BMP4 信号在高等脊椎动物的胚胎发育中具有非常重要的作用，它参与多种组织结构的 形成。在肠道发育中，它的作用更为广泛，在维持肠上皮的生长、肠壁层次的形 成、肠管沿前后轴的区域性分化以及肠神经系统的建成等诸多方面起着重要的作 用。这个信号通路中的成员一旦发生突变将导致不同畸形和疾病，如食道闭锁／食 管气管瘘、肛门闭锁和青少年肠息肉病等的发生。转基因动物实验发现敲除Shh 信号的鼠发生了从单纯的肛门狭窄到复杂的一穴肛等各种不同类型的肛门直肠畸 形，说明肛门直肠的正常发育需要Shh信号，提示我们肛门直肠畸形发生可能与 Shl佃MP4信号异常有关。 本研究包括动物实验和人体标本实验两部分内容：①ETU诱导大鼠胚胎肛门 观察畸形发生过程中的病理形态学变化并检测Shh／BMP4信号通路中的三个关键 信号与肛门直肠畸形发生的关系。②ShhmMP4信号在人类先天性肛门直肠畸形 中表达的研究：检测肛门直肠畸形患儿直肠末端Shh／BMP4信号的表达状况，探 讨这些基因与人类先天性肛门直肠畸形的关系，为寻找人类先天性肛门直肠畸形 的致病基因提供线索。 材料与方法 一、实验材料 实验动物：Wistar大鼠由中国医科大学盛京医院动物实验中心提供。 病例标本：收集在我院手术治疗的肛门直肠畸形病人40例，其中低位畸形25 例，高位畸形15例，男27例，女13例，平均年龄1．5个月。收集非胃肠道疾病 死亡如新生儿窒息、颅内出血等10例为对照组，其中男6例，女4例，平均年龄 1．0个月。标本处理：无菌条件下取直肠末端后壁肠组织，置于．75℃冰箱中保存。 隆抗体购于Santa NiKon Esoo光学显微镜，NIS．Elements Uv．3000型紫 Eclipse F2．30图像采集软件， 统。 二、实验方法 1、ETU诱导大鼠胚胎肛门直肠畸形的演变与Shh／BMP4表达的关系的研究。 ①动物模型的建立：实验动物随机分为ETU组和对照组。在妊娠第10天时给ETU 组孕鼠经胃管注入I％ETU，用量为125 mg／kg；对照组给予等量的生理盐水。分 免疫组化染色：对照组和ETU组的各时间组各取3只孕鼠，胎仔置于4％多聚甲 醛中固定过夜，常规酒精脱水、石蜡包埋，所得标本矢状位连续切片，切片厚度 组各为30只胎仔，取其直肠检测Shh、Gli2和BMP4的蛋白表达。 2、Shh／BMP4信号在人类先天性肛门直肠畸形中表达的研究。直肠标本的石 基因在40例肛门直肠畸形病人和10例无畸形儿直肠末端的表达状态。 2 13．0for 3、数据的统计学处理：数值以L+S表示，用SPSSwindows软件进行 统计学分析，组间比较用单因素方差分析或t检验，P0．05有统计学差异。 结 果 l、ETU诱导大鼠胚胎肛门直肠畸形的演变与Shh／BMP4表达的关系的研究 免疫组化染色：组织切片观察ETU组63．2％胚胎发生肛门直肠畸形，对照 组未见明显畸形，证实本组畸形稳定。鼠胚泄殖腔正常发育的形态学特点：胚胎 12．5天到14天主要以泄殖腔形态变化为特征，同时可见生殖结节的迅速生长。胚 胎14天到16天主要以尿直肠隔下降并与泄殖腔膜融合为主要特征。ETU组畸形 鼠胚的泄殖腔发育主要有两个异常：一是在发育早期泄殖腔形态的异常，导致尿直 肠隔的位置很高不能有效分隔泄殖腔；二是尿直肠隔下降障碍，未与泄殖腔膜融 合，直肠和泌尿生殖道间存在共同