氨基酸和多巴对映体的毛细管电泳手性拆分新体系分析.pdfVIP

1 氨基酸和多巴对映体的毛细管电泳手性拆分新体系研究 研究生：林向成 导师：赵书林（教授） 摘要 长期以来，人们一直认为 L-氨基酸是生物体内唯一的氨基酸存在形式，但是 近年来许多研究发现，在人和动物体内存在着多种 D- 氨基酸，并已证明部分 D- 氨基酸是在细胞中直接生物合成，且生物体内的 D- 氨基酸具有某种重要的 生理功能。因此，氨基酸的手性拆分和检测在生命起源、发育、病变及衰老研 究中，均具有重要的意义。左旋多巴是目前治疗帕金森病的有效、常用药物。 但 D-多巴对人体具有毒性。左旋多巴中 D-多巴含量过多，病人服用后会产生 副作用乃至造成生命危险。因此，多巴的手性拆分及左旋多巴光学纯度的检验 在临床医学上具有重要的意义。 本论文探索了氨基酸对映体的高效毛细管电泳分离分析的新体系，研究了 氨基酸与手性选择剂、胶束准固定相的相互作用机理，建立了四个氨基酸对映 体分离新体系。此外，还建立了左旋多巴光学纯度检验的新方法。论文的主要 内容如下： 1. 考察了 NBD-Cl 衍生氨基酸的影响因素。以α-CD、β-CD、HP- β-CD、 γ-CD 为手性选择剂，考察了它们对 NBD-氨基酸手性分离的影响。结果发现 β-CD 和 HP- β-CD 对 NBD-氨基酸具有拆分能力，且 HP- β-CD 的拆分能力 强于β-CD 的拆分能力。该法在 9min 内同时拆分了7 种混和氨基酸对映体，一 共拆分了 14 种氨基酸对映体。 2. 将价廉易得的 2,4-二硝基氟苯用于氨基酸柱前衍生，把负电性羧甲基- β-环糊精添加到背景电解质中，研究了负电性手性选择剂手性拆分氨基酸的作 用机理，分别拆分了 7 种混合氨基酸对映体和 5 种混合氨基酸对映体，一共拆 分了 16 种氨基酸对映体。 3. 以HP- α-CD 作为手性选择剂，利用毛细管区带电泳技术，不仅使苯丙 氨酸、酪氨酸和色氨酸对映体得到完全手性拆分，而且使 3 种氨基酸混和物也 达到了完全分离。 2 4. 探索了新型胺类手性衍生试剂-脱氢松香酸酰氯与氨基酸的衍生反应。探 讨了氨基酸衍生物与十二烷基硫酸钠作用机理，在仅含 25mmol/L 十二烷基硫 酸钠的胶束电动色谱中快速实现了氨基酸的手性消除分离。 5. 建立了多巴手性分离新体系，并应用于左旋多巴光学纯度检测。 D- 多巴 2 含量在 0.1~2.0%范围内具有良好的线性关系(R =0.9990) ，并测定左旋多巴的光 学杂质为 0.2% 。 关键词：毛细管电泳，氨基酸，左旋多巴，手性拆分，手性消除分离 3 Study on Novel Methods for Enantiomeric Separation of Amino Acids and Dopa by Capillary Electrophoresis Poststudent:Lin Xiangcheng Tutor: Pro. Zhao Shulin Abstrace It has long been presumed that amino acids accur solely as L-enantiomers in proteins and body fluids of mamm