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四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的作用
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目 录
中文摘要………………………………………………………………………1
英文摘要………………………………………………………………………4
研究论文四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响
前言…………………………………………………………………………………….7日lj吾……………………………………………………………………………………………..7
材料与方法………………………………………………………………8
结果…………………………………………………………………………………………….14
7
附图……………………………………………………………………..1
附表……………………………………………………………………..20
讨论…………………………………………………………………………………………….22
结论……………………………………………………………………..27
参考文献………………………………………………………………..28
l
综述中药复方影响心肌细胞凋亡的研究现状……………………………3
致谢…………………………………………………………………………..37
个人简历……………………………………………………………………..38
中文摘要
四妙勇安汤合生脉饮对缺氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响
摘 要
目的:研究四妙勇安汤合生脉饮对缺氧/复氧损伤后原代培养乳鼠心
肌细胞的影响,探讨四妙勇安汤合生脉饮对缺氧/复氧损伤后原代培养乳
鼠心肌细胞凋亡的影响。
方法:本研究应用醇沉技术制备四妙勇安汤合生脉饮的药液,采用胰
蛋白酶和胶原酶联合消化的方法分离SD乳鼠心肌细胞,采取两次差速贴
壁法对心肌细胞进行纯化,原代培养,建立细胞模型,倒置相差显微镜下
观察原代培养的心肌细胞,不同时间下对细胞形态拍照并录像,利用免疫
细胞化学方法对心肌细胞进行纯度鉴定。利用高纯氮气建立心肌细胞缺氧
/复氧模型,制备细胞缺氧用的密闭方盒,自制缺氧盒有进气口和出气口,
先用注射器自出气口尽量抽真空,再自进气口向缺氧盒中充高纯氮气
30—40min,置换盒中的氧气,关闭缺氧盒的进气口与出气口,缺氧时间
4h,复氧时间2h。原代培养的乳鼠心肌细胞随机分为三组。正常对照组
(control
group):不进行缺氧/复氧的处理,不更换培养液,也不加四妙
勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预;模型组(model
group):进行缺氧
/复氧的处理,更换无糖无血清培养液,但不加四妙勇安汤合生脉饮的醇
沉药液;药物干预组(treatment
group):进行缺氧/复氧的处理,更换无
糖无血清培养液,加四妙勇安汤合生脉饮的醇沉药液进行干预。实验开始
时正常对照组更换完全培养基入培养箱培养6h;模型组、药物干预组更
换无糖无血清培养液,缺氧培养4h,随后模型组更换完全培养基,药物
干预组更换含有10%四妙勇安汤合生脉饮醇沉药液的完全培养基,复氧
2h,根据不同实验目的用于实验。采用MTT比色法检测心肌细胞存活力,
采用全自动生化自动仪检测心肌细胞培养液AST的含量,采用流式细胞
术AnnexinV-FITC/PI双染法检测心肌细胞凋亡率,比较各组心肌细胞存
活力、AST含量、心肌细胞凋亡率的情况,从而得出四妙勇安汤合生脉
饮对心肌细胞凋亡的影响结果。
结果:(1、)原代培养的乳鼠心肌细胞在倒置相差显微镜下观察,接种时
心肌呈悬浮状态,最早在6小时内观察到心肌细胞贴
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