基因治疗Chapter 15-Gene Therapy.ppt

配体/受体（ligand/receptor) 纳米颗粒（nanoparticle) 线粒体（mitochondrion，Mt） 染色体三要素： 端粒 telomere 着丝粒 centromere 自主复制序列 autonomous replication sequence 人工染色体（artificial chromosome) MAC mammalian artificial chromosome HAC human artificial chromosome HMC human microchromosome (HNC, human natural microchomosome) 基因疫苗(gene vaccine) 基因疫苗常被称作裸DNA疫苗，是由来源于病原体的一个抗原编码基因及作为其载体的质粒DNA组成。通过注射或粒子轰击等途径将基因疫苗导入人体后，这段基因可在活体细胞中合成抗原蛋白，从而引起机体免疫反应。从1990年科学家偶然发现可能性到1993年在小鼠中开始试验，该领域的发展十分迅速。 目前基因治疗载体存在以下问题： 　　　导入率低 　　　整合率不高 　　　遗传不稳定 　　　容量小 　　　宿主范围有限 　　　随机插入突变 　　　可能产生重组野生型病毒 　　　免疫原性问题 载体发展新趋势： 病毒——病毒 病毒——非病毒 杂合载体 靶细胞(target cell)的选择 靶细胞的选择原则： 疾病与受累细胞 基因表达与细胞 细胞获得与培养的难易 靶细胞的类型： 体细胞(somatic cell) 生殖细胞（germline cell)（禁区） 成纤维细胞(fibroblast) 肌细胞(myocyte,muscle cell) 肝细胞(hepatocyte,liver cell) 淋巴细胞(lymphocyte) 内皮细胞(endothelial cell) 干细胞（stem cell） 4.2.1 成纤维细胞（fibroblast) 优点： 取材、培养容易 基因易导入 表达产物可进入血液循环 缺点： 传代次数有限 有较强的免疫原性 微囊化 角质细胞( keratinocyte) 4.2.2 肌细胞（myocyte） 优点： 可直接进行DNA转移 缺点： 不能分裂生长 成肌细胞(myoblast) 不整合，不能持久表达 表达水平低 肌细胞（myocyte） 人成肌细胞的分离和培养 Desmin抗体AEC染色胞浆为红色，说明其中含有肌原纤维； 胞核苏木精染色，为蓝色 4 .2.3 肝细胞（hepatocyte） 优点：肝脏是重要的器官 缺点：一般不增殖 切除/刺激 需特异性的启动子（albumin ；alpha-fetoprotein） 回输体内时，要附着在支持物上才能存活 去唾液酸糖蛋白 (asialoglycoprotein ,ASGP） 去唾液酸血清类粘蛋白(asialoorosomucoid ,ASO) 4 .2.4 淋巴细胞(lymphocyte) 肿瘤浸润淋巴细胞（ TIL）曾被广泛地用作靶细胞 缺点：分裂能力不强，可传代次数少 4.2.5 内皮细胞(endothelial cell) 优点：与血流接近，产物可直接进入血液循环 缺点：转导效率低 RV+DEAE 干细胞（stem cell） 4.2.6 造血干细胞（hemopoietic stem cell） 优点：具有再增殖能力 缺点：取材、培养困难 外源基因的插入使其在增殖能力丧失 分化