紫外线照射下人皮肤纤维母细胞 TGFβ和HSP70的表达.pdf

紫外线照射下人皮肤纤维母细胞 TGF．p和HSP70的表达 曹 宇杨宇张番汤浩 《中国医替大学．沈阳n0001) 摘要关于紫外线照射下诱导产生热休克蛋白70的生物学机理目前还不清楚，本研究者 的研究结果显示其生物信号的传递过程可能与细胞因子一TGF且的产生和分泌有 关．为进一步证明=者在细胞表达的相关关系，本研究采用人体皮肤纤维母细胞，① 在不同的紫外线照射剂量下．检测TGF一母mRNA表达与HSP70表达水平的相关关 系；②应用抗TGF．p11型受体抗体，探讨在紫外线照射下细胞产生、分泌的TGF一日 对细咆内HSP70表达的作用。结果证明，紫外线照射下在细胞内诱导HSPT0的生 物反应过程中TGF-fl是参与其信息传递的重要困索之一。 关键词紫外线B；TGF．8；热休克蛋白70 l 前 言 影响最大。紫外线主要照射在人体表面的皮肤组织，造成物理性损伤或引起细胞功能的改变， 甚至引起基因突变、癌化等¨J。作为机体的防御反应，皮肤细胞在紫外线照射下诱导产生热 休克蛋白70(HeatShockProtein 70，HSP70)，以保护细胞内新生蛋白质正确的折叠和组装．并 修复损伤变性的蛋白质，恢复蛋白质的立体构造【2】。关于紫外线照射下细胞诱导产生HSP70 的生物信息通路至今还不清楚。细胞内HSPT0表达的调节主要是在转录水平【3J，例如，温热 Shock 等刺激可激活热休克转录因子(Heat Transcription Shock 在于热休克蛋白质基因上游的启动子．热休克因子(Heat 克蛋白基因转录。研究表明，紫外线照射下不能直接激活HSTF，提示在紫外线照射下HSTF Growth 的表达”J，提示TGF-p可能在此信息传递通路上起重要的作用。为进一步证明紫外线照射下 细胞的TGF—B表达与HSP70表达水平的相关关系，本研究采用人体皮肤纤维母细胞，在不同 的紫外线照射剂量下，检测TGF．B 的作用。 158 2材料和方法 2．1细胞和细胞培养 采用正常人体皮肤纤维母细胞(由日本理化研究所提供，RBC0222，筑渡，日本)。在添加 EssentialMedium 10％仔牛血清(FBS，GIBCO)的MEM—a(Minimumalpha)培养液中加入 37C下培养。 2．2紫外线照射 3W，Cosmo-Bio，usA)检测之。 2．3用反转录PeR方法检测各实验条件下TGF．ISmRNA表达水平 RNA加入到20nL反转 使用Isogen从细胞中提取RNA。首先进行反转录反应：取10／tg CTG GACACC 应：在含有反转录产物的PCR反应液中。加入TG即DNA合成引物(5’一GCC 依次培养30s。反应产物在1．5％琼脂糖凝胶中电泳分析。 2．4应用Western印迹法检测各实验条件下细胞HSPT0表达水平 在各实验条件下细胞经紫外线照射后．在37℃新鲜的培养液中培养12h，用0．1％SDS溶 解细胞，提取蛋白质，通过比色分析进行定量。从各实验样本中分别采取12／zg蛋白质，在9％ 的SDS-聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳，然后将凝胶转入到阳离子化尼龙膜上．在4℃条件下用血 Japan)