响应面法优化纳豆激酶液体发酵!.PDF

响应面法优化纳豆激酶液体发酵! 胡 升 梅乐和 姚善泾 （浙江大学化学工程与生物工程学系，杭州， ） !"##$% 摘 要 用响应面法对!"#$%%&’ ’&()$%$’ 液体发酵生产纳豆激酶的培养条件进行了优化。首 先用&’()*+,,-./01(2 方法对相关影响因素的效应进行评价并筛选出了有显著正效应的胰蛋 白胨和有显著负效应的种龄、发酵温度和 浓度等 个因素，其他因素对纳豆激酶产 3( 4&5 6 $ 6 量无显著影响。第$ 步用最陡爬坡路径逼近最大产酶区域。最后由中心组合实验及响应面 分析确定了主要影响因素的最佳条件。在优化培养条件下，液体发酵液中纳豆激酶浓度从 "##7 8%! 9:; 1< 提高到" !"6 86= 9:; 1< 。 关键词 纳豆激酶，枯草芽孢杆菌， 方法，响应面方法，优化 &’()*+,,-./01(2 纳豆激酶（ ， ）自 年由须 本研究将采用这 种数学统计方法对影响 2(,,>*C2(D+ 3E "A=% $ ［］ " 见洋行 发现以来，因其溶解血栓效果好、半衰 纳豆激酶液体发酵的诸多因素进行考察和评 期长、可口服、易获得等优点，得到众多研究者 价，拟对筛选得到的重要因素进行优化，确定较 ［ ］ 的关注$ F @ 。不少学者也对优化其液体发酵条 优的发酵条件，以备为后续放大实验提供依据。 件作了研究。但到目前为止，所采用的优化手 " 材料及方法 段几乎都是每次改变一个因素的逐因子实 ［］ 验% ，或是在逐因子实验的基础上采用正交实 ! " ! 试 剂 ［］ = 纤维蛋白原（ ）购自 公司； 验补充考察了氮源、碳源间的交互效应 。这 PCQ0C2>K+2 NCK1( 些方法的不足在于仅能比较各因素已选定水平 凝血酶（ ）为杭康生物药业公司生产； RI0>1QC2 的优劣，无法提供未考察区域的信息，不能进行 尿激酶购自苏州新宝制药厂。其余试剂均为市 预报和控制。我们认为，影响纳豆激酶液体发 售。 酵的因素众多，选择哪些因素和哪些交互效应 ! " # 菌 种 作为重点考察对象是值得深入研究的。如果遗 !"#$%%&’ ’&()$%$’ 4<-"：本实验室从纳豆中 漏了重要因素，则所得结论的可信度以及其意 筛选获得（菌种筛选另文发表）。 义将会受到影响。 ! " $ 培养基及培养条件 &’()*+,,-./01(2 法基于不完全平衡块原 "8 ! 8 " 培养基 理，能从众多变量间快速筛选出最为重要的因 斜面培养基：采用<. 固体培养基。 ［］ A