柴胡龙牡汤对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的影响及其机制的实验研究.ppt

LOGO 柴胡龙牡汤对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡的影响及其机制的实验研究 * ppt课件 研 究 背 景 临床运用柴胡龙牡汤治疗存在咳嗽、咳痰等肺 经症状的肺癌患者 43例，显效 5例（12%），有效 31例（72%），无效 7例（16%），总有效率（显效＋有效）达 84% [1] 。 体内实验研究已证实，该药具有抑制 Lewis 肺癌细胞生长的作用，对荷瘤小鼠的抑瘤率可达 31.4% [2] 。 [1]调整气机治疗肺癌肺经症状43例临床研究. 秦海运，殷东风;实用中医内科杂志, 2009,23(4)80-82 . [2]肺积宁方对C57小鼠肺癌VEGF蛋白表达和生存质量的影响．现代肿瘤医学，2009, 17（6）：1042-1045. 柴胡龙牡汤前期研究 * ppt课件 中药与细胞凋亡的研究 肿瘤的发生不仅因细胞过度增殖，还与细胞凋亡机制受到抑制不能正常进行细胞死亡清除有关 细胞凋亡过程多因素、多基因联合作用结果。中药复方成分更为复杂，其作用多环节、影响细胞凋亡方面可能更为有效 辽宁中医药大学附属医院 中药与细胞凋亡 细胞凋亡与肿瘤 研 究 背 景 * ppt课件 实 验 动 物 C57BL/6J 近交系小鼠，共 60 只，4 - 6 周龄，清洁级，体重 18-20 g，雌雄各半。 中国医学科学院医学实验动物研究所提供，饲养于辽宁中医药大学实验动物中心。 辽宁中医药大学 辽宁中医药大学附属医院 实 验 材 料 * ppt课件 瘤 株 Lewis 肺癌瘤株 ( Lewis Lung carcinoma LLC ) ，为小鼠来源的上皮样肺腺癌细胞。 由中国医科大学免疫教研室提供。 辽宁中医药大学 辽宁中医药大学附属医院 实 验 材 料 * ppt课件 柴胡龙牡汤 药物组成：由柴胡、龙骨、牡蛎、黄芩、半夏、太子参、桔梗、炙甘草等11味中药组成。 药物煎煮方法：先后用 10 倍水煎 60 min 、8倍水煎煮 40 min ，合并煎煮液，过滤后，浓缩至 1.0 g 生药 / ml，置于 4 ℃冰箱保存备用。 辽宁中医药大学 辽宁中医药大学附属医院 实 验 药 品 * ppt课件 顺 铂 顺铂(DDP)：齐鲁制药有限公司产品, 制剂规格为10 mg / ml 。 每次给药前用 0.9% 生理盐水，把10mg 顺铂稀释成1mg / ml 顺铂注射液备用。 辽宁中医药大学 辽宁中医药大学附属医院 实 验 药 品 * ppt课件 动 物 造 模 细胞株的复苏及C57BL/6J 小鼠体内传代 注入小鼠腹腔中， 每只小鼠注射0.2ml。 加入2ml生理盐水 吹打混匀 离心两次 每次5min 37℃水浴箱 -80℃冰箱 辽宁中医药大学 辽宁中医药大学附属医院 * ppt课件 动 物 造 模 模型制备 辽宁中医药大学 镜下调整细胞浓度 为1×107/ml 无菌抽取 小鼠腹腔积液 腹部隆起 明显的小鼠 0.2ml/只，接种于 小鼠右侧腋部皮下 辽宁中医药大附属医院 * ppt课件 动 物 分 组- 模型组 中药组 化疗组 综合组 正常组 肺癌模型组 接种肺癌瘤株，不做治疗处理。 中药柴胡龙牡汤组 接种肺癌瘤株，并中药治疗。 单纯顺铂化疗组 接种肺癌瘤株，并化疗。 柴胡龙牡汤＋顺铂综合组 接种肺癌瘤株，中药联合化疗处理。 正常对照组 不做造模及治疗处理。 共分 5 组 辽宁中医药大学 辽宁中医药大学附属医院 * ppt课件 实 验 给 药 辽宁中医药大学 化疗组 顺铂注射液0.1ml /只/ d （DDP 0.1mg） 腹腔注射化疗，共3 次，于第1、3、5天给药。 同时生理盐水0.4ml/只/d灌胃，共12天 中药组 柴胡龙牡汤0.4ml /只/ d （含生药0.4g） 灌胃，共连续12天。 第1、3、5天，生理盐水0.1ml /只/ d ，腹腔注射。 辽宁中医药大学附属医院 * ppt课件 实 验 给 药 辽宁中医药大学 综合组 顺铂注射液给药剂量、方法同化疗组，柴胡龙牡汤用法同中药组 。 模型组 正常组 0.9%生理盐水0.4ml /只/ d 灌胃，共连续12天。 并于第1、3、5天， 0.9%生理盐水0.1ml /只/ d ，腹腔注射。 辽宁中医药大学附属医院 * ppt课件 实 验 取 材 各组小鼠均于末次给药后24小时进行取材 完整剥离出瘤体，称重后于冰盒上，将瘤块切开在无坏死区共取材 3 份，标本块大小约为1 mm3 。 辽宁中医药大学 Text 蛋白测定 电镜检测 免