复合诱变选育碱性蛋白酶高产菌株-毕业论文(设计).docVIP

精品 PAGE 学生毕业论文 题 目：复合诱变选育碱性蛋白酶高产菌株 姓 名： 学 号： 200902020128 系 别： 应用化学系 班 级： 生化0911 指导教师： 2011 年 11 月 1 日 复合诱变选育碱性蛋白酶高产菌株 摘要 以枯草芽孢杆菌为出发菌株，通过紫外线和亚硝酸钠复合诱变，筛选碱性蛋白酶高产突变株，并进行液体发酵筛选试验。从大量突变株中进行筛选，获得1株遗传性稳定的碱性蛋白酶高产突变株D-5，其酶活力由出发菌的2.055，提高到7.369，提高258%。 关键词：枯草芽孢杆菌；碱性蛋白酶；诱变育种 Composite mutagenesis breeding high alkali protease strain Abstract With bacillus subtilis strain for starting, through the ultraviolet ray and sodium nitrite composite mutagenesis, screening alkali protease high yield mutations, and solid state fermentation screening test. From a large number of mutations in screening, get 1 strain of genetic stability of the alkali protease high yield mutations D-5, the enzyme activity of the bacteria by 2.055, rising to 7.369, increased by 258%. Keywords: bacillus subtilis; Alkali protease; Mutation breeding TOC \o 1-3 \h \z \u 1 引言 4 1.1.1碱性蛋白酶定义 4 1.1.2 简介 4 1.2碱性蛋白酶生产菌种 5 1.3碱性蛋白酶的应用 5 1.3.1洗涤剂 5 1.3.2制革业 5 1.3.3纺织业 5 1.3.4水解液制造 5 1.3.5水产加工 5 1.3.6 感光胶片工业 5 1.3.7医学 5 1.4碱性蛋白酶的作用机理及影响因素 6 1.4.1作用机理 6 1.4.2 影响因素 6 1.5本实验研究意义 6 2 材料与方法 6 2.1 实验材料 6 2.1.1菌种 6 2.1.2培养基 7 2.1.3 实验所用试剂 7 2.1.4 实验所用器材 8 2.2 实验方法 8 2.2.1枯草芽孢杆菌活化 8 2.2.2 孢子悬浮液的制备 8 2.2.3 物理诱变—紫外线诱变 8 2.2.4 化学诱变—亚硝酸钠 9 2.2.5碱性蛋白酶活力测定—Folin 酚法 10 3．结果与分析 14 3.1 紫外线诱变筛选结果 14 3.2 亚硝酸钠诱变筛选结果 14 3.3致死曲线 14 3.3.1紫外线诱变结果 14 3.3.2 亚硝酸钠诱变结果 15 4遗传稳定性研究 15 结论 15 参 考 文 献 18 1 引言 随着遗传学和分子生物学领域的飞速发展, 许多新型复杂的技术被应用于菌种选育, 如原生质体融合育种技术和基因工程育种技术等, 但是诱变育种技术仍是提供菌株生产能力的重要有效手段。它获得的正突变率相对较高,可以得到多种优良突变体和新的有益基因类型。另一方面,诱变育种存在一定的盲目性和随机性,在实际应用中,研究者应根据出发菌株及实验室条件等具体情况来选择合适的诱变方法。本实验室将物理因子和化学因子结合起来对多种酵母菌株进行复合诱变,均得到了理想菌株。此外,我们正在尝试反复采用几种诱变因子进行多次诱变,以期得到更为理想的菌株。 1．1 碱性蛋白酶概述及简介 1.1.1碱性蛋白酶定义 碱性蛋白酶是在碱性范围内水解蛋白质肽键的酶类，最适值pH为9~11，属内肽酶中的丝氨酸蛋白水解酶类。是商品蛋白酶中应用最