水质粪大肠菌群的测定 文档资料.ppt

水质 粪大肠菌群的测定 （多管发酵法） HJ/T347-2007 四川省城镇供排水协会 曾蓉宁 2 水中微生物简介 ? 自然界的水可分为地下水和地面水，除了 地下深层水外，如湖泊，河流，海洋等各 种地面水中都存在着各种各样的微生物。 但它们所含的微生物种类，数量和分布都 不相同。其中有些是“土生土长”的。另 一些水生细菌是外来的，它们来自土壤， 空气，垃圾，工厂废物或城市下水道污水。 而来自下水道的微生物中，很可能含有人 体肠道致病菌，例如霍乱，伤寒，副伤寒 和痢疾等病原菌。 4 污水的细菌学检验 ? 水质的细菌学检验主要包括两个 常规项目：细菌总数和总大肠菌群。 5 总大肠菌群测定的两种方法 ? 多管发酵法 ? 滤膜法 6 粪大肠菌群的定义 ? 粪大肠菌群 是总大肠菌群的一部分，主要 来自粪便。在 44.5 ℃温度下能生长并发酵乳 糖产酸产气的大肠菌群称为粪大肠菌群。 用提高培养温度的方法，造成不利于来自 自然环境的大肠菌群生长的条件，使培养 出来的菌主要为来自粪便中的大肠菌群， 从而更准确地反映出水质受粪便污染的情 况。 7 适用范围 ? 本标准适用于地表水，地下水 及废水中粪大肠菌群的测定。 8 原理 ? 多管发酵法 是以最可能数（ most probable number ），简称 MPN 来表示试验结果的。实际 上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌 密度和卫生质量的一种方法。如果从理论上考虑， 并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有 大于实际数字的倾向。不过只要每一稀释度试管 重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含 量的估计值，大部分取决于那些既显示阳性又显 示阴性的稀释度。因此在实验设计上，水样检验 所要求重复的数目，要根据所要求数据的准确度 而定。 9 培养基及试剂 ? 本标准所用试剂除另有说明，均为符合国 家标准的分析纯化学试剂；实验用水为新 制备的去离子水。 10 单倍乳糖蛋白胨培养液 ： ? 将 10g 蛋白胨、 3g 牛肉寖膏、 5g 乳糖和 5g 氯化钠加热溶解于 1000mL 蒸馏水中，调节 溶液 pH 为 7.2 — 7.4 ，再加入 1.6% 溴甲酚紫 乙醇溶液 1mL ，充分混匀，分装于试管中， 于 115 ℃高压灭菌器中灭菌 20min ，贮存于 冷暗处备用。 11 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 ： ? 按上述乳糖蛋白胨培养液的制备方法配制。 除蒸馏水外，各组分用量增加至三倍。 （即按上述配方比例三倍（除蒸馏水外）， 配成三倍浓缩的乳糖蛋白胨培养液） 12 EC 培养液： ? 成分： 胰胨 20 克， 乳糖 5 克， 胆盐三号 1.5 克，磷酸氢二钾（ K 2 HPO4 ） 4 克，磷酸 二氢钾（ KH 2 PO4 ） 1.5 克，氯化钠 5 克，蒸 馏水 1000 毫升。 ? 制法：将上述成分加热溶解，然后分装于 含有 玻璃倒管的试管中。置高压蒸气灭菌 器中， 115 ℃高压灭菌器中灭菌 20min ，灭 菌后 pH 应为 6.9 。 13 培养基的存放 ? 在密封瓶中的脱水培养基成品要存放 在大气湿度低，温度低于 30 摄氏度的 暗处，存放时应避免阳光直接照射， 并且要避免杂菌倾入和液体蒸发。当 培养液颜色变化，或体积变化明显时 应废弃不用。 14 测定步骤 ? 1. 水样接种量的选择 ? 将水样充分混匀后，根据水样污染的程度 确定水样接种量。每个样品至少用三个不 同的水样量接种。同一接种水样量要有五 管。 ? 相对未受污染的水样接种量为 10ml 、 1 ml 、 0.1 ml 。受污染水样接种量根据污染程度接 种 1 ml 、 0.1 ml 、 0.01 ml 、或 0.1 ml 、 0.01 ml 、 0.001 ml 等。 15 ? 培养液的浓度和量的选择： ? 如接种体积为 10 ml ，则试管内应装有三倍 浓度乳糖蛋白胨培养液 5mL ；如接种量为 1mL 或少于 1mL ，则可接种普通浓度的乳糖 蛋白胨培养液 10mL 中。 16 2. 初发酵试验 将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨 培养液的发酵管中。在 37 ℃± 0.5 ℃下培养 24h ± 2h 。产 酸和产气的发酵管表明试验阳性。 入在倒管内产气不明显，可轻拍试 管，有小气泡升起的为阳性。 17 注意： ? 加入水样时，先将培养管管口用酒 精灯消毒一次，加入水样后再用酒 精灯消毒一次，封口