原创力文档- 1、本文档共14页，可阅读全部内容。
- 2、原创力文档（book118）网站文档一经付费（服务费），不意味着购买了该文档的版权，仅供个人/单位学习、研究之用，不得用于商业用途，未经授权，严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等，侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传，本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺！文档内容仅供研究参考，付费前请自行鉴别。如您付费，意味着您自己接受本站规则且自行承担风险，本站不退款、不进行额外附加服务；查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档，您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等，请点击“版权申诉”（推荐），也可以打举报电话：400-050-0827(电话支持时间：9:00-18:30)。
查看更多
载体的选择和工程菌的构建过程中应注意的问题 一、获取目的基因 二、重组 三、转化 反转录法 反转录-聚合酶链反应法 化学合成法 对已发现的基因的改造 载体选择 重组方法 受体细胞的选择 转化方法 方法 四、筛选 五、表达 筛选方法 注意的问题 抗性筛选，蓝白班筛选······ 是否容易产生抗性突变，是否有假阳性 融合表达 包含体表达 分泌型表达 表达方式 二、重组 质粒载体 噬菌体载体 柯斯质粒载体 M13噬菌体载体 噬菌粒载体 载体 （一）载体的选择 载体 表达型载体：如pUC18/19，pGEM-T载体 克隆型载体：如pBR322，TA载体 （二）重组方法：用T4DNA聚合酶将粘性末端连接起来 1.克隆基因的酶切位点问题 2.载体的酶切问题 3.连接片段浓度比的问题 需要考虑的问题： (1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法。 三、转化 （一）受体细胞的选择 大肠杆菌 枯草杆菌 链霉菌 酵母菌 昆虫细胞（家蚕） 哺乳动物细胞（中国仓鼠卵巢细胞 CHO） 植物细胞（拟南芥菜、烟叶） 常用的受体 大肠杆菌 用于接受质粒：C600、W3110、HB101、JM83、 JM101（Aps、Tcs、Cms） 用于接受l-DNA：LE392、ED8654 酵母菌 哺乳动物细胞 CHO 毕赤酵母 啤酒酵母 重组和转化需要共同注意的问题 目的基因的稳定性，酶切位点 载体的酶切位点，选择标记 载体的拷贝数，载体和受体的相容性 受体的表达系统 目的菌对密码子的偏爱 四、筛选 （一）筛选方法 （二）注意事项 (1)遗传学方法 (2)物理筛选法 (3)核酸杂交法 (4)表达产物分析法
文档评论（0）