HPLC技术讲座系列之色谱柱的日常维护及应用解决方案教学材料.ppt

色谱柱再生（用下列每种溶剂20~30倍柱体积冲洗） 反相色谱柱 100％甲醇---100％乙腈---75％乙腈/25％异丙醇---100％异丙醇 ---100％二氯甲烷---100％正己烷---100％异丙醇 正相色谱柱 50：50正己烷/氯仿 --- 甲醇 --- 二氯甲烷或者100%醋酸乙酯 油脂类物质，可用异丙醇清洗 处理正相色谱柱 试剂严格除水 色谱柱柱体积 4.6 x 50 0.83 mL 0.62 4.6 x 30 0.5mL 0.37 4.6 x 250 4.15 mL 3.11 4.6 x 150 2.5 mL 1.87 2.1 x 50 0.17 mL 0.13 2.1 x 30 0.10 mL 0.08 色谱柱 空柱管 柱 尺寸 体积 体积 (mm) （mL） （ml） 三、异常色谱峰产生的原因和解决方案 常见异常色谱峰： 前延峰； 拖尾峰； 叉峰（裂峰）； 宽峰/馒头峰。 前延峰解决方案 几种常见的前延峰 峰前延解决方案 1. 样品过载 前拖、后拖或平头峰 2. 溶剂效应----使用流动相溶解样品 a.用纯甲醇溶解样品 Tf＝0.891 b.用流动相溶解样品 Tf＝1.072 流动相为乙腈：4%冰醋酸水溶液＝48：52 姜黄素标准品 用流动相溶解样品的替代方案 用流动相稀释至原 来浓度的1/4倍 a. 用纯甲醇溶解样品 Tf＝0.811 b. 将a图中的样品用流动相稀释 至原来浓度的1/4倍 Tf=0.980 c. 用流动相溶解样品 Tf＝1.028 石杉碱甲标准品的测定 色谱柱： Ulitmate XB－C18，4.6×250mm； 流动相：甲醇：缓冲盐溶液(0.08M醋酸铵水溶液， 冰醋酸调节PH至6.0)＝25：75；? ?? ???检测波长：308nm；? ?? ?? ? 温度：室温26 度；? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 流速: 1 ml/min；? ?? ?? ?? ?进样量：20ul 3. 缓冲盐浓度较低----增加流动相中缓冲盐的浓度 a. 乙腈：3%磷酸：无水乙醇＝80：10：10 Tf＝0.737 b. （乙腈：3%磷酸：无水乙醇）＝80：10：10）：50mM磷酸二氢钠＝80：20 Tf＝0.930 注射用苦参碱的测定色谱柱：Ultimate XB-NH2-2, 5um, 4.6×250mm；? ?柱??温：室温24度；? ??? 流速：1.0ml/min；? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ? 检测波长：220nm；? ?? ? 进样量：20ul； 4. 流动相中加入适量的四氢呋喃 a . 50mM磷酸二氢钾（用2mol/L的KOH溶解 调节pH5.0）/乙腈＝97.5/2.5 Tf＝0.873 c. 50mM磷酸二氢钾（用2mol/L的KOH溶解调节 pH5.0）/乙腈/THF＝97.5/2.5/1 Tf＝0.986 阿莫西林胶囊的测定色谱柱：Ultimate AQ－C18，5um，4.6×250mm；? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?检测波长：254nm；? ?? ???温度：室温28度；? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ?? ???流??速：1.0ml/min；? ?? ? 进样量：20ul； 5）柱温太低----适当升高柱温的温度 有助于增加流动相传质速率，减少因静电作用引起的前拖。 2）柱外死体积大 色谱柱反冲，修复色谱柱；选择性能良好的色谱柱。 硬件原因： 1）色谱柱损坏(筛板阻塞 和柱头塌陷 ) 、装填不当 用细径管路和小体积流通池，各接口连接紧密 。 拖尾峰解决方案 几种常见的拖尾峰 地红霉素：Tf = 1.268 二甲基苯氧乙酸：Tf = 1.991 头孢地嗪钠：Tf = 3.109 拖尾峰解决方案 通常非极性和弱极性的化合物能获得良好