保健食品中总黄酮的测定.pdf

十五、保健食品中总黄酮的测定 1 范围 本方法规定了保健食品中总黄酮的分光光度测定方法。 本方法适用于以含黄酮类成分为主要原料的保健食品中总黄酮含量的测定。 第一法 2 原理 试样中的总黄酮经乙醇提取、聚酰胺粉吸附、甲苯和甲醇洗脱净化后，以芦丁为对照样 品，采用分光光度法在360nm 波长下测定总黄酮的吸光度，标准曲线法进行定量。 3 试剂和材料 注：除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682 规定的二级水或三级水。 3.1 试剂 3.1.1 乙醇（C H OH ）。 2 5 3.1.2 聚酰胺粉。 3.1.3 甲苯（C H ）。 7 8 3.1.4 甲醇 （CH OH ）。 3 3.2 标准品 芦丁标准样品的分子式、相对分子量、CAS 登录号见表 1，纯度≥90% ，或经国家认证 并授予标准物质证书的标准物质。 表1 芦丁标准样品的中文名称、英文名称、CAS 登录号、分子式、相对分子量 中文名称 英文名称 CAS 登录号 分子式 相对分子量 芦丁 Rutoside 153-18-4 C27H30O16 610.52 3.3 标准溶液配制 3.3.1 芦丁标准储备液：称取在102℃烘箱中恒重后的芦丁标准样品 （3.2 ）5.0mg （精确至 0.01mg ），加甲醇溶解，并转移至100mL 容量瓶中定容至刻度，此溶液浓度为50μg/mL 。 3.3.2 芦丁标准系列工作液：精密吸取0.0 、1.0、2.0 、3.0 、4.0 、5.0mL 的标准储备液（3.3.1 ）， 分别置于10mL 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成芦丁浓度分别为0.0μg/mL 、5.0μg/mL 、 10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL 、25μg/mL 的标准系列工作液。 4 仪器和设备 4.1 紫外/可见分光光度计。 4.2 超声波清洗器。 4.3 层析柱。 64 4.4 分析天平：感量分别为0.01mg 、0.0001g 和0.001g 。 5 分析步骤 5.1 试样制备 称取一定量的试样，加乙醇（3.1.1 ）定容至25mL ，摇匀，超声提取20min ，放置，吸 取上清液1.0mL，于蒸发皿中，加1g 聚酰胺粉（3.1.2 ）吸附，水浴挥去乙醇，然后转入层 析柱 （层析柱内径可根据每个产品具体情况确定）。先用20mL 甲苯（3.1.3 ）洗脱，弃去甲 苯液；然后用甲醇（3.1.4 ）洗脱，合并洗脱液并定容至25mL ，即得。 5.2 标准曲线的制作 取标准系列工作液（3.3.2 ），于波长360nm 测定吸光度，以芦丁标准工作液的浓度为 横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。 5.3 试样溶液的测定 取试样溶液（5.1 ），于波长360nm 测定吸光度，根据标准曲线得到试样溶液中总黄酮 的浓度，平行测定次数不少于两次。 6 结果计算 试样中总黄酮含量按下式计算: C V V 100 1 3 X  V  M 1000 2 式中： X—试样中总黄酮的含量，以芦丁（C27H30O16 ）计， 单位为克每一百克或克每一百毫 升（g/100g 或g/100mL ）； C—试样溶液中总黄酮的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL ）； V —试样定容体积，单位为毫升（mL ）； 1 V — 吸取试样溶液体积，单位为毫升（mL ）； 2 V —过柱后定容体积，单位为毫升（mL ）； 3