抗中性粒细胞胞浆抗体ANCA的检测与临床意义.doc

抗中性粒细胞胞浆抗体 (ANCA) 检测及临床意义 ――间接荧光免疫 (IIF) 方法（欧盟） 一、 ANCA 概念及分类 抗中性粒细胞胞浆抗体是一种以中性粒细胞和单核细胞胞浆成份为靶抗原 的自身抗体，对系统性血管炎炎症性肠病等多种疾病的诊断和鉴别诊断具有重要 的意义，已成为自身免疫性疾病的一项非常重要的常规检测项目。 目前，已经有十余种中性粒细胞胞浆成分被证实为 ANCA 的靶抗原，蛋白酶 3(PR3)，髓过氧化物酶 (MPO)，人白细胞弹性蛋白酶 (HEL) ，乳铁蛋白 (LF) ，组织蛋白酶 G(Cath G)，杀菌 /通透性增强蛋白 (BPI) ，人溶酶体相关膜蛋白 2 (H-LAMP2) ，溶菌素 (LYS)，天青杀素，防御素，烯醇化酶，葡萄糖醛酸酶。 根据乙醇固定的中性粒细胞基质片中，可以区分两种不同的荧光模型： 一种胞浆型（c-ANCA ），是均匀分布在整个中性粒细胞胞浆中的颗粒型荧光， 细胞核无荧光。在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现相同。其主要的靶抗原是蛋白酶 3(PR3)。 另一种是核周型 （p-ANCA ），是围绕中性粒细胞细胞核周围的平滑带状荧光。由多种抗原引起， 主要靶抗原是髓过氧化物酶 (MPO)，人白细胞弹性蛋白酶 (HEL) ，乳铁蛋白 (LF)，组织蛋白酶 G(Cath G)，杀菌 /通透性增强蛋白 (BPI) ，人溶酶体相关膜蛋白 2 (H-LAMP2) ，溶菌素 (LYS)等。不同抗体在乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片中，其荧光模型表现有所不同。 抗 MPO 抗体产生的 p-ANCA 因耐甲醛，其荧光 模型与在乙醇固定的中性粒细胞中出现的 c-ANCA 类似故叫甲醛抗性的 p-ANCA 。而其他非 MPO 抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应， 无荧光表现， 这种类型又称为甲醛敏感的 p-ANCA 。故根据乙醇和甲醛固定的中性粒细胞片表现，可初步判 ANCA 的靶抗原 PR3，MPO，非 MPO 三类。二、 ANCA 的检测 间接荧光免疫方法是检测 ANCA 的参考方法或者标准方法，至今也是最常用 的经典方法。 IIF 是区分 c-ANCA 和 p-ANCA 的基础，有较高敏感性，可半定量， IIF 测定的是总 ANCA ，不能准确区分靶抗原，需特异性的检测方法作为补充。由于多种免疫性疾病患者存在 ANA ，用 IIF 法检测 ANCA 时，会产生干扰实验结果的判断。为避免干扰现象，采用了四基质联合的检测即：乙醇固定的粒细胞； 甲醛固定的粒细胞； Hep-2（人喉癌细胞）细胞；猴肝细胞。基质片各细胞分布及意义如表一所述。 ANCA 荧光模型及表现如表二所述。 表一：四联基质片分布及意义 区分 ANA 的干扰： Hep-2 细胞有 Hep-2 甲醛固定 典型荧光表现， 细胞 粒细胞 区分 ANA 与 ANCA ：借助猴肝细  1：判断 c-ANCA ， 2：区分 p-ANCA 对甲 醛敏感还是耐受  甲醛抗性 p-ANCA ：抗 MPO 抗体耐甲醛，其荧光与在乙醇固定的 中性粒细胞中的 c-ANCA 类似 甲醛敏感 p-ANCA ：其他非 MPO 抗体不与甲醛固定的中性粒细胞反应，无荧光表现 胞和其中的肝血窦粒细胞。 猴肝 乙醇固定 ANCA 阳性，只有肝血窦粒细胞出 细胞 粒细胞 现荧光，。如果两者同时阳性，所有肝细胞核都有荧光。  是标准实验基质。 区分两种荧光模型： c-ANCA ； p-ANCA 。 表二： ANCA 荧光模型及表现 荧 光 表 荧光模型 乙醇固定粒细胞 甲醛固定粒细胞  现 Hep-2 细胞 猴肝细胞 c-ANCA A N A 阴 p-ANC A 阳性  胞质呈现弥散的细颗 胞质呈现弥散的细颗 粒荧光，胞质荧光清 粒荧光，胞质荧光清 阳性 晰勾勒出核的轮廓， 晰勾勒出核的轮廓， 分 页 核 之 间 荧 光 增 分 页 核 之 间 荧 光 增 强。 强。 甲 醛 呈现核周胞质平滑丝 胞质呈现弥散的细颗 耐 受 状带荧光。荧光阳性 粒荧光，胞质荧光清 p-AN 的胞质主要集中在分 晰勾勒出核的轮廓， CA 页核周围，形成环状 分 页 核 之 间 荧 光 增 或不规则的块状。 强。 甲 醛 呈现核周胞质平滑丝 敏 感 状带荧光。荧光阳性 p-AN 的胞质主要集中在分 阴性 CA 页核周围，形成环状 或不规则的块状。  肝细胞本身无荧光。 阴性 仅肝血窦粒细胞出现 荧光。 肝脏细胞本身无荧光。 阴性 仅肝血窦粒细胞出现 荧光。 肝脏细胞本身无荧光。 阴性 仅肝血窦粒细胞出现 荧光。 A 细胞核阳性，荧光强 细胞核呈现 肝细胞核阳性。 NANCA 阴性 阴性 荧光表现， 如 肝血窦粒细胞未见荧 A 度增强 ANA 所述 光。 阳 甲醛耐