环境微生物学实验五.docxVIP

组别： 姓名： 学号： 日期： 实验五 从土壤中分离和纯化微生物及平板菌落计数 实验目的 掌握常见的分离纯化微生物的基本操作技术，学习分离纯化的基本原理和方法。 了解平板计数的基本原理和方法。 实验原理 微生物的分离与纯化是指从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程。分离纯化微生物的常用方法有平板划线法、平板涂布法等，因为其方法简单、设备简单、分离效果好，所以一直 被实验室普遍选用。 活菌计数的基本方法是将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。 实验器材 微生物材料：从校园采集的土壤样品 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基 试剂：无菌水 实验仪器和其他用品：培养箱、无菌玻璃棒，无菌移液管，无菌小试管、试管架，接种环、三角涂布玻璃棒、酒精灯、记号笔、11个三角瓶。 实验步骤 采样 取表层以下5-10cm处的土样，放入灭菌的袋中备用，或放入4度冰箱中暂存。 制备土壤稀释液 用电子天平称取5g土于装有45ml无菌水的三角瓶中，振摇约20min，使土壤与水充分混匀。 梯度稀释 取1ml土壤悬液加入装有9ml无菌水的试管，以此类推制成10-1、10-2、10-3等不同稀释度的土壤溶液。 平板分离单菌落（无菌操作） ，选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量含菌的土壤悬液，在酒精灯旁进行划线操作，用左手控制培养皿，右手捏接种环，按分区划线法接种，然后烧去接种环上的残菌。最后平板倒置恒温培养：细菌37℃培养1-2d；放线菌28℃培养5-7d；霉菌28℃培养3-5d。 活菌计数 从10-4至10-6各管中，分别吸出0.2ml菌液加至相应的编号的平板表面上。用左手控制培养皿，并将皿盖开启一缝，右手涂布玻璃棒把培养皿上的菌液轻轻涂开、均匀铺满整个平板，并防止平板培养基破损。最后平板倒置恒温培养：细菌37℃培养1-2d；放线菌28℃培养5-7d；霉菌28℃培养3-5d。 经培养后，选出菌落数在30-300个皿范围内的各培养皿，计算每皿的菌落数，并记录结果。 注意：1、全过程要在无菌条件下进行。 2、接种环使用前在酒精灯上灼烧至红热。 3、蘸取少量菌液，先在培养皿上划一条，不要转动接种环。 实验结果 如实写出实验报告，分析实验结果，讨论实验中出现或存在的问题。 思考题 1、平板培养时为什么要把培养皿倒置？