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映山红花总黄酮抗心肌缺血损伤作用的 H_2S介导 ROCK通路抑制
机制
心肌缺血性疾病一直是威胁人类健康的主要疾病之一 , 缺血性心血管疾病 ,
是世界范围内常见的死亡率和发病率较高的常见病。 有关心肌缺血性损伤的病理
机制及有效地预防和治疗冠心病、 心绞痛等心肌缺血性疾病的药物研究是大家关
注的重点研究课题之一。
映山红花总黄酮 (total flavones of rhododendra,TFR) 系从映山红花中提
取的有效部位 , 其主要成分为槲皮素、 金丝桃苷及芦丁等黄酮类化合物 , 我们之前
的研究表明映山红花总黄酮对大鼠和小鼠的心肌细胞缺氧性损伤有保护作用。 然
,TFR的保护作用机制还不是很清楚 , 本研究的目的探讨 TFR对心肌缺氧损伤保护作用的机制 , 重点研究 TFR作用与 Rho相关的卷曲螺旋激酶 (Rho associated
coiled coil-forming kinase,ROCK), 钾离子通道及 H2S的关系。
实验目的 :1. 观察 TFR对于心肌缺血、缺氧性损伤的保护作用 ;2. 探讨 TFR
抗心肌缺血性损伤作用与 ROCK的关系 , 尤其是 H2S介导的 ROCK抑制与其抗损伤
作用的关系 ;3.TFR 对心肌细胞钾离子通道的作用。 实验方法 :1. 冠状动脉左前降
支结扎致大鼠心肌缺血再灌注损伤模型 , 大鼠冠状动脉左前降支结扎 30min 后,
再灌注 90min, 测定心电图、血清乳酸脱氢酶 (lactate dehydrogenase,LDH) 和肌
酸激酶 (creatinine kinase,CK) 活性的测定 , 观察不同组心肌梗塞面积的比率 ,
并进行心肌组织苏木素 - 伊红 (HE)染色观察病理学改变 , 使用 western blot 方法
检测其心肌组织中 ROCK1和 ROCK2蛋白的表达。
新生乳鼠心肌细胞缺氧再给氧模型 , 检测细胞活力 ,LDH 活性和心肌肌钙
蛋白 T(cardiac troponin T,c Tn T) 水平和丙二醛 (malondialdehyde,MDA) 含量。
使用 Western blot 检测 ROCK1和 ROCK2蛋白表达水平。
皮下注射 Iso 致小鼠心肌缺血模型 , 在 CSE基因敲除小鼠及野生型小鼠上
Sc Iso20mg/kg 以制备心肌缺血损伤模型。观察造模后 1、 2、 5、 15、20min 各
时间点的 ECG,观察 ST段的变化 , 测定 LDH、CK-MB等生化指标 ,HE 染色后检查小
鼠心肌病理改变 , 使用 Western blot 检测心肌组织 ROCK1,ROCK2和 MLC1蛋白表
达水平。
大鼠心肌细胞膜片钳检测 , 心肌细胞上的钾离子通道的外向和内向电流均被记录。为减少细胞大小的误差 , 采用电流密度进行记录 (p A/p F) 。
记录心肌细胞上使用 TFR、Ba Cl2 、 Apamin 或 IBTX 前后细胞膜上电流的变化。实验结果 :1. 冠状动脉左前降支结扎致大鼠心肌缺血再灌注损伤可致大鼠
ECG的 ST段明显抬高 , 再灌注 30 min 时尤为明显 ,TFR(40 、80 mg/kg) 能显著抑
制缺血再灌注大鼠心电图中 ST段的抬高 ,ROCK抑制剂 Y27632也能抑制心肌缺血
再灌注大鼠 ECG的 ST 段的抬高。
缺血再灌注大鼠血清中 LDH活力和 CK水平显著上升 ,20 、40、80 mg/kg TFR
Y27632 1mg/kg 也能显著抑制 LDH和 CK活性上升。 3.TFR20、 40、80mg/kg 可
显著减少 I/R 损伤引起心肌梗死面积百分比 (IS/AAR),verapamil 1.6 mg/kg 和
Y27632 30 mg/kg 同样减少 IS/ARR。
4.TFR 40 、 80 mg/kg 导致心肌细胞病理学变化。 5.I/R 损伤引起 ROCK1和
ROCK2蛋白表达增高。
TFR20、 40 和 80 mg/kg 及 ROCK通路阻断剂 Y27632 30mg/kg 显著的抑制 I/R
诱导的心肌细胞 ROCK1和 ROCK2蛋白表达的升高。 6.TFR 在 3.7-300 mg/L 的浓
度范围内 , 可明显抑制 A/R 引起的新生大鼠心肌细胞活力下降 , 减少 LDH活力、 c
Tn T 水平和 MDA含量。
7.A/R 可明显增加大鼠的新生乳鼠心肌细胞的 ROCK1和 ROCK2蛋白表达水
,TFR 33.3 、100 和 300 mg/L 或者 ROCK通路阻断剂 Y27632 1μ mol/L 显著的抑制了 ROCK1和 ROCK2蛋白的表达。 8. 在大鼠的心肌细胞 , 加入选择性内向整流钾离子
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