微生物实验-培养基配制和灭菌.ppt

实验目的 实验原理 实验试剂 实验器皿 实验统筹安排 实验流程 S1-玻璃仪器的准备 S2-配制培养基 S2-分装培养基 S3-摆斜面、倒平板 S4-清洁卫生 思考题 微生物实验四：培养基的配制和高压灭菌 了解配制培养基的基本原理，掌握配制的一般方法与步骤 学习掌握高压蒸汽灭菌的操作方法 学习掌握微生物实验相应的规范操作 由人工配制适合微生物生长繁殖和积累代谢产物的混合养料称为培养基。含有碳源、氮源、能源、无机盐、生长因子和水等物质。 按物理状态可分为液体、半固体和固体三类。 加热密封锅体内的水，让水蒸气压力升高，提高锅内蒸汽温度而达到对物品灭菌的目的。 牛肉膏蛋白胨固体培养基（1000mL）： 牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15-20g， pH7.4-7.6 高氏一号固体培养基（1000mL）： 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g，K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15-20g，pH7.4-7.6 平皿、三角瓶、试管、简易分装装置 灭菌锅（手动、自动）、超净工作台 4人为1中组 完成后每人：1根斜面[试管](牛肉膏蛋白胨) 2个平板[平皿](牛肉膏蛋白胨、高氏一号各1) 250mL 200mL 干燥→包扎→高压灭菌→干燥→待用 做棉塞→待用 待用 清点 清洗 平 皿 三角瓶 试 管 250mL 200mL 250mL 200mL 相应实验操作讲解 棉塞、分装套的制作 平皿/三角瓶/试管包扎 高压灭菌 摆斜面、倒平板 棉塞、分装套的制作 准备材料：纱布、棉花 P1.棉塞制作 将纱布覆盖在三角瓶上，在瓶口处用力往下塞棉花 用绳子将上端绑紧，并剪去多余纱布，放置待用 P2.分装套的制作 准备材料：漏斗、乳胶管、止水夹、玻璃滴头 将各部分连接起来即成简易分装装置 P1.平皿包扎 P2.三角瓶包扎 将干燥好的平皿，以10个为一叠，如图用报纸包捆 一边卷动平皿，一边将两边的报纸折叠，如图所示 最后将纸角嵌入报纸内部以固定 平皿/三角瓶/试管包扎 装好培养基后，塞上前面做好的棉塞 覆上一张牛皮纸 将棉线的线头朝上，并用大拇指压住 棉线绕过拇指，沿瓶口下方绕一圈，但不回绕拇指 反复缠绕后棉线穿入拇指留出的空圈,线头保留在圈外 抽动一开始压住的线头，将棉线捆紧，完成捆绑 P3.试管包扎 将几根试管握成一捆 用一张牛皮纸将试管上端缠绕包裹起来 将上端牛皮纸反折下来，用前述捆扎方法捆扎起来 高压灭菌 取出装料桶，往锅内加水至指定刻度 P1.加水 P2.装料 将装料桶放回锅内，装入待灭菌的物品 P3.加盖 盖上并旋紧盖子，并关闭排气阀 P4.排冷空气 ℃ MPa 0 108 115 121 126 135 138 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 压力表 开启电源，锅内温度压力上升 压力上升至0.05MPa,开启排气阀,让压力降至0 关闭排气阀，继续加热，让温度压力上升 P5.升压 P6.保压 开关排气阀门，让温度在121℃保持20-30min P7.降压 达规定时间后,关闭电源,让锅内压力下降至0 P8.开锅取料 摆斜面、倒平板 P1.摆斜面 将灭菌好的试管如图放置，凝固后即成斜面 P2.倒平板 超净工作台内，用75%酒精擦拭双手，进行消毒 单手操作将灭菌好的平皿打开一条小缝 另外一只手拿起三角瓶 靠近火焰，将三角瓶的培养基，倾倒入平皿 倒入量为15-20mL，2-3mm高 15-20mL，2-3mm高 为什么灭菌前要将平皿、斜面(试管)、三角瓶等用牛皮纸或报纸包扎起来？ 为什么做平板要将平皿和培养基分开灭菌后，再在超净工作台内倒平板？ Thank You! 在组设置中可使用此模板作为演示培训材料的起始文件。 节 右键单击幻灯片以添加节。 节可以帮助您组织幻灯片或促进多个作者之间的协作。 备注 使用“备注”节传递备注或为受众提供其他详细信息。 演示过程中，可在“演示文稿视图”中查看这些备注。 请记住字体大小(对于可访问性、可见性、录像和联机生产都非常重要) 协调的色彩 特别注意图形、图表和文本框。 请考虑与会者将以黑白或 灰色调打印。请运行测试打印，以确保当以纯黑白和 灰色调打印时，您的颜色工作正常。 图形、表格和图表 保持简单: 如果可能，请使用一致的、不分散的样式和颜色。 标记所有图表和表格。 * 这是使用切换的概述幻灯片的另一个选项。 * * * * Microsoft Engineering Excellence Microsoft 机密 * 演示文稿是否尽可能简明扼要? 请考虑将多余的内容移到附录。 将放映