细菌检验技术.pptx

第四节 微生物检验的自动化与微型化第一节 细菌形态检验技术第三节 细菌生化鉴定技术第二节 细菌接种与培养技术第五节 细菌的其他鉴定技术53124本 章 内 容本章内容学习目标： 掌握：革兰染色的原理、操作及结果判断；细菌接种技 术、培养方法、细菌在不同培养基中的生长现象、生化反应的原理。 熟悉：细菌染色标本检查的基本程序，细菌培养常用培养基和器材。 了解：细菌不染色标本的检查方法和用途；免疫学技术、分子生物学技术及自动化检测技术等鉴定微生物。 本章重点：★革兰染色的原理、操作方法及意义 ★细菌培养及生长现象 ★细菌生化反应及临床应用第一节 细菌形态检验技术一、染色标本镜检 （一）染色标本检查的一般程序第一节 细菌形态检验技术（二）常用的染色方法1.单染色法 细菌标本经涂片、干燥固定后，滴加染液染色1分钟，水洗后待玻片燥后即可镜检第一节 细菌形态检验技术（二）常用的染色方法 2.革兰染色法 【方法】 紫色——革兰阳性菌（×1000）红色——革兰阴性菌（×1000）第一节 细菌形态检验技术（二）常用的染色方法 2.革兰染色法【结果】第一节 细菌形态检验技术（二）常用的染色方法 3.抗酸染色法 【结果】 抗酸染色结果（×1000）：红色为抗酸杆菌，蓝色为非抗酸杆菌第一节 细菌形态检验技术（三）其他染色法 1.特殊结构染色法 （1）荚膜染色法荚膜染色结果，×1000第一节 细菌形态检验技术（三）其他染色法 1.特殊结构染色法 （2）鞭毛染色法鞭毛染色结果，×1000第一节 细菌形态检验技术（三）其他染色法 1.特殊结构染色法 （3）芽孢染色法芽孢染色结果，×1000第一节 细菌形态检验技术（三）其他染色法1.特殊结构染色法 （4）异染颗粒染色法 异染颗粒亚甲蓝染色结果：白喉棒状杆菌，×1000第一节 细菌形态检验技术（三）其他染色法 2.负染色法 墨汁荚膜染色（脑脊液中的新型隐球菌，×400）第一节 细菌形态检验技术二、不染色标本镜检 1.压滴法 压滴法镜检结果：尿涂片，×400第一节 细菌形态检验技术二、不染色标本镜检 2.悬滴法 第一节 细菌形态检验技术二、不染色标本镜检 3.毛细管法 第一节 细菌形态检验技术三、其他显微镜检查第二节 细菌接种与培养技术一、基本条件 红外接种灭菌器接种环培养皿第二节 细菌接种与培养技术一、基本条件生物安全柜培 养 箱第二节 细菌接种与培养技术 培养基成份培养基：人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。营养物质：牛肉膏、蛋白胨、肉浸液、糖醇类、血液、鸡蛋及动物血清、生长因子、无机盐等水凝固剂：琼脂、明胶抑制剂：孔雀绿、煌绿、胆盐、抗生素等 指示剂：溴麝香草酚蓝，溴甲酚紫、酚红等 第二节 细菌接种与培养技术培养基种类（按用途分）基础培养基：普通琼脂平板营养培养基：满足营养需求较高细菌的生长，如血琼脂平板、巧克力琼脂平板等鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖铁培养基（KIA）及各种生化反应用培养基选择培养基：具有选择性抑制非目的菌生长作用，用于选择性培养目的菌，如SS平板、中国蓝琼脂平板、伊红美蓝琼脂平板等增菌培养基：用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤、GN增菌肉汤特殊培养基：厌氧培养基、L型细菌培养基第二节 细菌接种与培养技术培养基第二节 细菌接种与培养技术液体培养基第二节 细菌接种与培养技术培养基的种类（按物理性状分类）液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。半固体培养基：含0.2％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。固体培养基：含2％～3％琼脂，用于细菌的分离培养。第二节 细菌接种与培养技术培养基制备程序调配—溶化—调Ph—过滤澄清—分装—灭菌—检定—保存培养基灭菌★ 基础培养基：121℃高压蒸汽灭菌15分钟★ 含糖培养基：113 ℃灭菌15分钟★ 含鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次★ 不耐高温的液体成分：滤过除菌第二节 细菌接种与培养技术二、细菌接种与培养技术 （一）无菌技术细菌检验的操作应在无菌室或生物安全柜内进行无菌室、生物安全柜使用前后均需进行消毒灭菌细菌检验使用过的物品使用前后需严格灭菌处理标本的采集严格无菌操作无菌试管、烧瓶的使用时注意管口灭菌第二节 细菌接种与培养技术（二）细菌接种与分离技术 灭菌接种环（针）—冷却—挑取标本（细菌）—接种—灭菌接种环（针）平板划线法 分区划线连续划线 第二节 细菌接种与培养技术分区划线法第一区划线灭菌接种环第二区划线灭菌接种环第三区划线灭菌接种环第二节 细菌接种与培养技术连续划线法第二节 细菌接种与培养技术半固体穿刺接种斜面接种液体接种第二节 细菌接种与培养技术（三）细菌培养方法一般培养（需氧培养）：培养需氧或兼性厌氧菌培养温度：35℃ ～ 37 ℃ 培养时间：18～24小时二氧化碳