结肠炎（ UC）模型的建立及药物的治疗测定.docxVIP

。 结肠炎（ UC）模型的建立及药物的治疗测定 DSS 是一种有蔗糖合成的，有抗止血和抗凝血作用的肝素样硫酸多醣体。 BALB/c 鼠的遗传背景为近交系，由亲兄弟姐妹遗传繁殖，因而它们之间的个体 差异就小，遗传基因更纯，整体素质更好。采用在蒸馏水中加入 DSS制成 5%DSS 溶液给予小鼠自由饮用造模。 一、确定 DSS的最适浓度 实验材料： BALB/c 小鼠 6 只，全是雌性。 8-10 周左右，体重约为 25-30g. 实验试剂：葡聚糖硫酸钠（ DSS）（MW=40000），配制成 4%的浓度溶液。 实验仪器：电子天平，生物显微镜，微量移液器，枪头。 实验方法：将小鼠随机分为 3 组，每组 2 只。分别为 正常对照组， 4%DSS浓度 组。 二．实验步骤 将 6 只小鼠正常喂养 5 天。 5 天以后，正常对照组继续正常饲养， 但 4%DSS浓度组分别喂养配置好的 4% 溶液 10ml。（一日 / 一次，连续 7 天， 7 天内每天同一时间测量小鼠体重，粪便，便血情况，并进行活动指数评分。 ）建模期间控制小鼠的食量。 疾病活动指数（ DAI）的评估 每日观察小鼠的体重、大便性状和隐血情况，按表 1 进行评分。将体重下降、大便性状和隐血情况的评分相加，得出每只小鼠的 DAI，以评估疾病活动情况。 1 DA I 评分标准 体重下降（ %） 大便形状 * 大便隐血 / 肉眼血便 计分 0 正常 正常 0 1~5 松散 隐血阳性 1 6~10 2 11~15 稀便 肉眼血便 3 >16 4 正常大便：成形大便；松散大便：不黏附于肛门的糊状、半成形大便；稀便：可黏附于肛门的稀水样便。 。 1 。 硫酸甲氨基酚法进行大便隐血试验 （试剂 : ① 10g/l 硫酸甲氨基酚乙酸溶液 : 称取硫酸甲氨基酚 1g，溶于 40ml 蒸馏水中，加冰乙酸 30ml 溶解，蒸馏水加至 100ml 混匀 。放入棕色瓶中避光保存，如有变色则应重新配制。 ② 3% 过氧化氢溶液。 方法 : 取少许粪便涂于玻片中央，滴加 10g/l 硫酸甲氨基酚乙酸溶液 3 滴，及 3% 过氧化氢溶液 3 滴混匀，立即观察结果。 阴性 (-):3 分钟后不出现玫瑰红色或樱红色 ; (+):30~60 秒钟内显玫瑰红色或樱红色 ; 强阳性 (++): 立即显玫瑰红色或樱红色 ; 最强阳性 (+++): 立即显深玫瑰红色或深樱红色 ; 隐血试验注意事项 : 1、3%过氧化氢易失效，用前滴加在血膜上，有气泡产生方可应用。 2、禁止使用铁、铜、叶绿素剂、碘化钾、溴化物等药物后检验。 3、试验用具应加热处理，以破坏污染的过氧化酶。 4、标本采集立即送检，并应从便表面与内部挑取两处粪便进行检验。 ） 组织学损伤的的评估 实验第 8 天用浓度 1%戊巴比妥 50-60mg/kg 腹腔注射麻醉，眼球取血，离心，取 血清。剖腹，观察结肠外观取肛门至回盲部的结肠，并测量结肠的长度。沿肠系 膜边缘纵行剖开， 在解剖镜下观察结肠大体形态。 每只小鼠于有严重炎症或溃疡 处取标本 2cm的结肠组织置于 10%中福尔马林浸泡固定， 24h 后常规石腊包埋、 切片 (4u m)，HE染色，观察组织学改变并按表 2 评分。组织学损伤程度用炎症、 病变深度、陷窝破坏评分与病变范围评分的乘积表示。 表 2 组织学损伤评分标准 项目 计分 炎症： 无 0 。 2 。 轻度 1 重 度 2 病变深度 : 无 0 黏膜 下 层 1 肌 层 2 浆膜 层 3 隐窝破坏 : 无 0 基底 1 /3 隐窝 被 破 坏 1 基底 2 /3 隐窝 被 破 坏 2 仅有 完 整 表 面 上 皮 3 全部 隐 窝 和 上 皮 被 破坏 4 病变范围 (/%): 1-25 0 26-50 1 51-75 2 76-100 3 二．造模 实验材料： BALB/c 小鼠 6 只，全是雌性。 8-10 周左右，体重约为 25-30g. 实验试剂：葡聚糖硫酸钠（ DSS），配制成 4 %的浓度（ MW=40000）（先做预实验， 确定 DSS的最佳浓度） 实验仪器：电子天平，生物显微镜，微量移液器，枪头。 实验方法： 1. 将小鼠随机分为 3 组，每组 2 只。分别为 正常对照组，阴性对照组，药物组。 。 3 。 将 6 只小鼠正常喂养 5 天。 5 天以后，正常对照组继续正常饲养，但阴性对照组、药物组分别喂养配置 好的 4% DSS溶液 7ml（只）。 （一日 / 一次，连续 7 天， 7 天内每天同一时间测量小鼠体重，粪便，便血情况，并进行活动指数评分。 ）建模期间控制小鼠的食量。 3. 第 8 天每组各取 1 只，眼球取血，解剖，并观察造模情况。 ( 测量标准同上 ) 同时给阴性对照组和药物组剩下的 1 只注射药物。