D N A的粗提取与鉴定.ppt

。。 精选文档 ②柠檬酸钠作用 防止血液凝固 ③作用机理 柠檬酸钠能与血浆中的Ca2+发生反响，生成柠檬酸钙络合物，血浆中游离的Ca2+大大减少，血液就不会凝固 讨论：提取鸡血中的DNA时，为什么除去血液中的上清液？ 答：血液分为两局部，一局部是血浆，一局部是血细胞，离心后除去的上清液是血浆 。。 精选文档 5、方法步骤 将制备好的鸡血细胞液5 mL～10mL，注入到50 mL烧杯中。向烧杯中参加蒸馏水20 mL，同时用玻璃棒充分搅拌5 min，使血细胞加速破裂。然后，用放有纱布的漏斗将血细胞液过滤至500mL。取其滤液。 ①提取鸡血细胞的细胞核物质 鸡血细胞破碎以后释放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取过程中为了减少DNA的损失，最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液 本卷须知： 。。 精选文档 讨论： 答：让细胞内浓度大于周围溶液的浓度，细胞会吸水以至胀破 〔1〕为什么要参加蒸馏水？参加蒸馏水后细胞会有什么变化？ 〔2〕用玻璃棒搅拌有什么意义？ 答：用玻璃棒搅拌可以加速血细胞和细胞核的破裂。注意应沿一个方向快速搅拌，但也不能太快太猛，防止打碎DNA 〔3〕滤去的是什么物质？得到的是什么？ 答：过滤将滤去的是细胞膜和核膜等物质；得到的是与蛋白质等物质结合在一起的DNA 。。 精选文档 ②溶解细胞核内的DNA 将氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L的溶40mL参加到滤液中，并用玻璃棒沿一个方向搅拌1min，使其混合均匀，这时DNA在溶液中呈溶解状态 沿烧杯内壁缓缓参加蒸馏水，同时用玻璃棒不停地轻轻搅拌，这时烧杯中有丝状物出现，注意观察丝状物呈什么颜色。继续参加蒸馏水，溶液中出现的粘稠物会越来越多。当粘稠物不再增加时停顿参加蒸馏水〔这时溶液中氯化钠的物质的量浓度相当于0.14 mol／L〕 ③析出含DNA的粘稠物 。。 精选文档 。。 精选文档 讨论：参加蒸馏水的目的？ 降低NaCl溶液浓度到使DNA溶解度最低点，使DNA从NaCl溶液中析出 将溶液中的DNA与其他杂质别离，这一步骤是实验成败的关键。实验中应该缓慢贴壁参加蒸馏水，并轻轻地沿一个方向不停地均匀搅拌，以利于DNA分子的附着和缠绕 本卷须知： 。。 精选文档 ④滤取含DNA的粘稠物 用放有多层纱布的漏斗，过滤步骤3中的溶液至 500mL的烧杯中，含 DNA的粘稠物被留在纱布上 ⑤将DNA的粘稠物再溶解 取 1个 50 mL烧杯，向烧杯内注入氯化钠的物质的量浓度为 2 mol／L的溶液 20mL。用钝头镊子将纱布上的粘稠物夹至氯化钠溶液中，用玻璃择不停地搅拌，使粘稠物尽可能多地溶解于溶液中 。。 精选文档 。。 精选文档 ⑥过滤含有DNA的氯化钠溶液 取1个100 mL烧杯，用放有两层纱布的漏斗过滤步骤5中的溶液。取其滤液，DNA溶于滤液中 ⑦提取含杂质较少的DNA 在上述滤过的溶液中，参加冷却的、酒精的体积分数为 95％的溶液 50mL〔使用冷却的酒精，对DNA的凝集效果较佳〕，并用玻璃棒搅拌，溶液中会出现含杂质较少的丝状物。用玻璃棒将丝状物卷起，并用滤纸吸取上面的水分。这种丝状物的主要成分就是DNA 。。 精选文档 。。 精选文档 答：因为DNA不溶于冷酒精，而其他物质可以溶解在酒精中，使含杂质较少的DNA丝状物可以析出,悬浮于溶液中 讨论： 〔2〕观察丝状物呈什么颜色？ 答：白色 〔1〕为什么要加50mL的冷酒精？ 。。 精选文档 取两支20 mL的试管，各参加氯化钠的物质的量浓度为0．015 mol／L的溶液5 mL，将丝状物放入其中一支试管中，用玻璃棒搅拌，使丝状物溶解。然后，向两支试管中各参加4mlL的二苯胺试剂。混合均匀后，将试管置于沸水中加热 5 min，待试管冷却后，观察并且比较两支试管中溶液颜色的变化 ⑧ DNA的鉴定 。。 精选文档 。。 精选文档 讨论： 答：有丝状物的试管变成蓝色，另一试管还是原来颜色 〔2〕这一鉴定结果说明什么问题？ 〔1〕比较两个试管中溶液的颜色有什么不同？ 答：提取出的丝状物是DNA 〔3〕 DNA的直径约为20×10-10 m，实验中出现的丝状物的粗细是否表示1个DNA分子直径的大小？ 答： DNA分子直径只有2 nm。丝状物是多个DNA子聚在一起形成的 。。 精选文档 答：整个实验共 第1次： 步骤1.细胞吸水胀破 第2次： 步骤3.使 DNA黏稠物析出 此实验过程中有几次使用蒸馏水？几次过滤？几次析出？几次搅拌？分别在哪一步？ 【实验总结】 两次蒸馏水： 三次过滤： 两次析出： 六次搅拌： 两次蒸馏水： 。。 精选文档 三次过滤： 第1次：步骤1. DNA存在于滤液里 第2次：步骤4. DNA存在于滤液里 第3次：步骤6. DNA被留在纱布上